摘要： 目的 體外培養(yǎng)、誘導(dǎo)主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞鈣化，并觀察其表型變化。 方法 使用膠原酶消化法從新鮮豬主動(dòng)脈瓣膜上分離并體外原代培養(yǎng)主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞，行免疫熒光染色細(xì)胞鑒定。取4~8代間質(zhì)細(xì)胞，隨機(jī)分為兩組，實(shí)驗(yàn)組：以含甘油磷酸、維生素C、地塞米松的鈣化培養(yǎng)基進(jìn)行鈣化誘導(dǎo)培養(yǎng)2周；對(duì)照組：以標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基培養(yǎng)2周。在光學(xué)顯微鏡下行鈣化結(jié)節(jié)計(jì)數(shù)，茜素紅染色觀察并半定量檢測(cè)鈣沉積含量；采用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)間質(zhì)細(xì)胞α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）及鈣化相關(guān)因子（骨鈣素、 骨橋蛋白、核心結(jié)合因子）的基因表達(dá)。 結(jié)果 從豬主動(dòng)脈瓣膜上成功分離并體外培養(yǎng)瓣膜間質(zhì)細(xì)胞，α-SMA及波形蛋白（vimentin）染色陽(yáng)性，血管性血友病因子（vWF）染色陰性。間質(zhì)細(xì)胞鈣化誘導(dǎo)培育2周可成功誘導(dǎo)鈣化，自發(fā)形成鈣化結(jié)節(jié)，實(shí)驗(yàn)組鈣化結(jié)節(jié)(156.25±17.38個(gè)/孔vs. 2.50±1.29個(gè)/孔)和鈣沉積 (17.52±2.04 vs. 1.00±0.22) 顯著高于對(duì)照組（P lt;0.05）; 實(shí)時(shí)RT-PCR提示：實(shí)驗(yàn)組αSMA、骨鈣素、骨橋蛋白、核心結(jié)合因子等表達(dá)均較對(duì)照組明顯升高（P lt;0.05）。 結(jié)論 體外誘導(dǎo)鈣化的瓣膜間質(zhì)細(xì)胞呈現(xiàn)相對(duì)激活狀態(tài)，表型向收縮表型和成骨表型轉(zhuǎn)化，可能為瓣膜鈣化的病理基礎(chǔ)。
引用本文： 陳思,董念國(guó),史嘉瑋. 主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞體外誘導(dǎo)鈣化的實(shí)驗(yàn)研究. 中國(guó)胸心血管外科臨床雜志, 2010, 17(5): 385-389. doi: 復(fù)制
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