目的克隆人血管內皮生長因子(hVEGF)基因VEGF165片段,構建pcDNA3.1/hVEGF165, 觀察其在COS-7細胞中的表達,為基因治療缺血性心臟病的研究奠定基礎。方法從合法引產的胎兒心肌組織中提取總核糖核酸(RNA),應用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法獲得hVEGF165基因,將其重組入T載體,聚合酶鏈反應(PCR)法鑒定并測序,雙酶切后克隆入真核表達載體pcDNA3.1/myc-his-B中,構建pcDNA3.1/hVEGF165重組體。用脂質體介導將其轉染COS-7細胞,蛋白印跡(Westernblotting)法檢測rhVEGF165的表達蛋白。結果用RT-PCR方法從胎兒心肌組織中獲得了正確的hVEGF165基因序列,并成功構建pcDNA3.1/hVEGF165,且實現(xiàn)轉染COS-7細胞的瞬時表達。結論構建的pcDNA3.1/hVEGF165轉染真核細胞COS-7能夠表達rhVEGF蛋白。
引用本文： 葛建軍,周正春,陳兵,等. hVEGF165基因克隆及其在COS-7細胞中的表達. 中國胸心血管外科臨床雜志, 2005, 12(3): 185-188. doi: 復制
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