目的 探索轉染hVEGF165 基因、人基質(zhì)細胞衍生因子1α（human stromal cell-derived factor 1α，hSDF- 1α）基因的大鼠成肌細胞在體外mRNA 和蛋白表達，為進一步檢測這兩種基因對血管生成的協(xié)同效應奠定基礎。 方法 取新生1 日齡雄性SD 大鼠，采用胰蛋白酶消化法體外分離培養(yǎng)、純化成肌細胞，并采用結蛋白免疫細胞化學染色鑒定。將質(zhì)粒增強型綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）-hVEGF165 和EGFP-hSDF-1α 轉染第3 代成肌細胞（轉染組），以未轉染質(zhì)粒的細胞作為對照組。體外培養(yǎng)后各時間點行RT-PCR、Western blot、ELISA 法檢測兩種質(zhì)粒mRNA 及蛋白的表達。 結果 培養(yǎng)的細胞經(jīng)鑒定確定為成肌細胞。熒光顯微鏡觀察示成功轉染hSDF- 1α和hVEGF165 進入成肌細胞，可見綠色熒光表達。RT-PCR 檢測示轉染組轉染后2、4、6、8 d 均可見hVEGF165 和hSDF- 1αmRNA 的表達，Western blot 檢測示轉染組轉染后2、4、6、8 d 成肌細胞內(nèi)均有hVEGF165 和hSDF-1α 蛋白表達，對照組均無相關表達。ELISA 檢測示對照組hSDF-1α 和hVEGF165 均穩(wěn)定表達，呈較低水平。轉染組轉染2 d 時hSDF-1α 和hVEGF165 表達均達較高水平，之后呈逐漸下降趨勢；轉染后各時間點間hSDF-1α 和hVEGF165 表達比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。轉染組轉染后各時間點與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。 結論 轉染hSDF-1α 和hVEGF165 進入大鼠成肌細胞后在體外均有表達，為下一步研究體內(nèi)是否表達提供了實驗依據(jù)。
引用本文： 何等旗,唐休發(fā),華成舸. 人基質(zhì)細胞衍生因子1α 和hVEGF165 基因轉染成肌細胞的實驗研究. 中國修復重建外科雜志, 2011, 25(10): 1239-1244. doi: 復制
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