目的 人Ⅰ型前膠原基因（Col Ⅰ A1）反義寡核苷酸（antisense oligodeoxyneucleotide，ASODN）對體外培養(yǎng)的人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞有抑制膠原合成作用，擬進(jìn)一步探討Col Ⅰ A1 ASODN 對裸鼠移植模型體內(nèi)的人增生性瘢痕的膠原合成作用。 方法 SPF 級BALB/c-nunu 品系6 ～ 8 周齡雌性裸鼠60 只，體重約20 g；取行瘢痕切除手術(shù)患者自愿捐贈的瘢痕組織塊去表皮后，移植至裸鼠背部肩胛內(nèi)側(cè)皮下，每只裸鼠移植1 塊，制備人增生性瘢痕裸鼠移植模型。將58 只成功制備模型的裸鼠根據(jù)處理方法不同，隨機(jī)分成3 組，于瘢痕移植2 周根據(jù)分組行經(jīng)皮穿刺瘢痕內(nèi)注射。A 組（n=20）：5 μL 濃度為3 mmol/L Col Ⅰ A1 ASODN、3 μL 脂質(zhì)體、92 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養(yǎng)基；B 組（n=20）： 3 μL 脂 質(zhì)體、97 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養(yǎng)基；C 組（n=18）：100 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)最初2 周每天注射1 次，之后隔天1 次，至實(shí)驗(yàn)取材。注射后2、4、6 周，對存活裸鼠進(jìn)行瘢痕硬度測量后，處死裸鼠取瘢痕組織行膠原染色組織學(xué)觀察以及透射電鏡觀察；提取細(xì)胞總RNA 后行RT-PCR 測定Col Ⅰ A1 mRNA 相對含量；ELISA 法行Col Ⅰ A1 蛋白定量分析。 結(jié)果 注射后6 周內(nèi)17 只裸鼠死亡；共41 只裸鼠40 塊瘢痕組織符合實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，納入實(shí)驗(yàn)；A、B、C 組各14、13、14 只。注射后2 周，3 組間瘢痕硬度比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P  gt; 0.05）；4、6 周時(shí)A 組與B、C 組比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P  lt; 0.05），B、C 組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P  gt; 0.05）。隨時(shí)間延長，組織學(xué)觀察示3 組Ⅲ型膠原表達(dá)上升，A 組最明顯，Ⅰ型膠原排列規(guī)則。透射電鏡觀察示A 組成纖維細(xì)胞退化，膠原纖維排列更趨于一致；B、C 組膠原纖維排列也逐漸規(guī)則。注射后2、4 周3 組間Col Ⅰ A1 mRNA 和蛋白表達(dá)量比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P  lt; 0.05）；6 周時(shí)A 組與B、C 組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P  lt; 0.05），B、C 組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P  gt; 0.05）。 結(jié)論 在人增生性瘢痕裸鼠移植模型的瘢痕內(nèi)注射Col Ⅰ A1 ASODN 可抑制Col Ⅰ A1 mRNA 及Ⅰ型膠原表達(dá)，促進(jìn)瘢痕組織成熟、軟化，脂質(zhì)體可促進(jìn)該抑制效果。

引用本文： 袁即山,利天增,祁少海. 人Ⅰ型前膠原基因反義寡核苷酸對人增生性瘢痕裸鼠移植模型膠原合成的作用. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2011, 25(6): 718-723. doi: 復(fù)制

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