目的 進一步研究血管內皮細胞（vascular endothelial cells，VECs）和脂肪干細胞（adipose-derived stromal cells，ADSCs）聯(lián)合培養(yǎng)對ADSCs 成骨分化的影響，為聯(lián)合培養(yǎng)VECs 和ADSCs 作為骨組織工程種子細胞的可能性提供實驗依據(jù)。 方法 分別自足月妊娠SD 大鼠和18 周齡SD 大鼠制備臍血來源的VECs 和ADSCs，行形態(tài)學觀察及免疫熒光染色鑒定。取第3 代ADSCs 與誘導培養(yǎng)6 周的VECs 按細胞比例分別為3 ∶ 1、1 ∶ 1 和1 ∶ 3 設為實驗組A、B、C 組，ADSCs、VECs 單獨培養(yǎng)設為對照組D、E 組。培養(yǎng)第7、14 天取各組細胞行ALP 和飽和茜素紅鈣染色，進行ALP 和骨鈣定性檢測；第4、7、14 天定量測定各組細胞ALP 和骨鈣素（osteocalcin，OC）含量。 結果 誘導培養(yǎng)6 周的臍血來源VECs 可見短梭形和多角形細胞混合生長，免疫熒光染色可見血管性血友病因子為陽性。ADSCs 培養(yǎng)可見貼壁單個核細胞形態(tài)單一，呈梭形生長，無重疊現(xiàn)象；免疫熒光染色可見CD90+。各組細胞培養(yǎng)第7 天，ALP 染色示A、D、E 組呈陰性反應，B、C 組可見部分陽性細胞；第14 天時D、E 組仍呈陰性反應，A、B、C 組可見片狀陽性細胞。培養(yǎng)第7 天，茜素紅染色示各組均未發(fā)現(xiàn)紅色陽性細胞；第14 天時A、B、C 組可見極少數(shù)陽性細胞，D、E 組未發(fā)現(xiàn)陽性細胞。各組ALP 含量隨時間延長均逐漸增高，其中B 組各時間點含量均最高，與其余各組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01），各時間點A、C 組與D、E 組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01），A、C 組間及D、E 組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。各組OC 含量隨時間延長逐漸增高，培養(yǎng)第7、14 天時B 組含量最高，各時間點B 組與其余各組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01），第4、14 天時C、D 組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01），第14 天時A、C 組和E 組比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05），其余各時間點各組間比較差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結論 大鼠臍血來源的VECs 能在體外誘導ADSCs 向成骨細胞方向分化，1 ∶ 1 比例分化能力最強。
引用本文： 王?？?劉流,趙德萍,何曉光,代曉明,李逸松,李玉曉. 體外血管內皮細胞和脂肪干細胞聯(lián)合培養(yǎng)對脂肪干細胞成骨分化的影響. 中國修復重建外科雜志, 2010, 24(4): 399-405. doi: 復制
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