探討陽離子脂質(zhì)體介導Ⅰ 型前膠原基因（Col Ⅰ A1）反義寡核苷酸（antisense oligodeoxyneucleotide，ASODN）轉染對人增生性瘢痕成纖維細胞Col Ⅰ A1 表達的影響。 方法 取患者自愿捐贈瘢痕組織，采用組織塊法培養(yǎng)人增生性瘢痕成纖維細胞并傳代。于6 孔板內(nèi)按32.25 × 104 個/ 孔的密度接種第4 代細胞，根據(jù)轉染液不同分為4 組：A 組為脂質(zhì)體加Col Ⅰ A1 ASODN，B 組為Col Ⅰ A1 ASODN，C 組為脂質(zhì)體，D 組為空白對照。轉染后8 h，1、2、3、4 d 分別提取細胞總RNA，行RT-PCR 后測定Col Ⅰ A1 mRNA 表達量；胃酶消化法提取ECM 中Col Ⅰ A1 蛋白，ELISA 測定其濃度。 結果 擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測顯示條帶清晰，無雜帶、明顯的引物二聚體及拖尾現(xiàn)象。Col Ⅰ A1 mRNA 相對表達量：轉染后8 h，A 組小于B、C、D 組，B、C 組小于D 組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；B、C 組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）；轉染后1 d，A、B 組小于C、D 組（P lt; 0.05），A、B 組間和C、D 組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05） ；轉染后2 d，各組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；轉染后3、4 d，A 組小于B、C、D 組，B 組小于C、D 組（P lt; 0.05），C、D 組間差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。Col Ⅰ蛋白濃度：轉染后8 h，A組小于B、C、D 組，B、C 組小于D 組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05），B、C 組間差異無統(tǒng)計學意義（PP gt; 0.05）；轉染后1 d，各組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；轉染后2、3、4 d，A、B 組小于C、D 組，C 組小于D 組（P lt; 0.05），A、B 組間差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結論 Col Ⅰ A1 ASODN 抑制Col Ⅰ A1 mRNA 和蛋白表達；陽離子脂質(zhì)體作為載體有增強效果，促進ASODN 進入細胞并在核內(nèi)分布。
引用本文： 袁即山,利天增,祁少海. 人Ⅰ型前膠原基因反義寡核苷酸抑制增生性瘢痕成纖維細胞膠原合成. 中國修復重建外科雜志, 2009, 23(6): 713-717. doi: 復制
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