目的 探討不同濃度的PRP 對(duì)體外培養(yǎng)的兔骨骼肌干細(xì)胞（skeletal muscle stem cells，SMSCs）誘導(dǎo)成骨的影響。 方法 1 歲齡新西蘭大白兔9 只，體重2.5 ～ 3.0 kg。從兔耳中央動(dòng)脈取血參照Landesberg 法制備PRP，并行全血和PRP 中PLT 計(jì)數(shù)。取兔右后肢比目魚(yú)肌，體外培養(yǎng)兔SMSCs，取傳至第3 代的SMSCs，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組加入含不同濃度（6.25%、12.50%、25.00% 和50.00%）自體PRP 的條件培養(yǎng)液進(jìn)行干預(yù)，對(duì)照組不加PRP。于干預(yù)不同時(shí)間點(diǎn)行ALP 染色觀察、ALP 活性測(cè)定、鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色、骨鈣素免疫熒光染色檢測(cè)各組細(xì)胞成骨活性，RT-PCR 檢測(cè)成骨啟動(dòng)基因核心結(jié)合因子α1（core binding factor alpha 1，Cbfa1）的表達(dá)。 結(jié)果 全血PRP 及PLT 計(jì)數(shù)為（3.06 ± 0.46）× 105 個(gè)/μL 和（18.08 ± 2.10）× 105 個(gè)/μL；ALP 染色觀察示，培養(yǎng)7 d 各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞染色呈陽(yáng)性，胞漿內(nèi)可見(jiàn)大量黑色顆粒沉積；對(duì)照組細(xì)胞染色呈陰性。各實(shí)驗(yàn)組ALP 活性均高于對(duì)照組（P lt; 0.05），其中12.50% 濃度組各時(shí)間點(diǎn)均高于其他濃度組（P lt; 0.05）。培養(yǎng)14 d 各實(shí)驗(yàn)組經(jīng)茜素紅染色可見(jiàn)桔紅色鈣結(jié)節(jié)形成；對(duì)照組未見(jiàn)鈣結(jié)節(jié)形成，礦化率為0。各實(shí)驗(yàn)組礦化率與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05），12.50% 濃度組礦化率均高于其余濃度組（P lt; 0.05）。培養(yǎng)7 d 各實(shí)驗(yàn)組骨鈣素免疫熒光染色呈陽(yáng)性，胞漿出現(xiàn)黃色熒光；對(duì)照組細(xì)胞染色呈陰性。RT-PCR 檢測(cè)示，培養(yǎng)4、12 和24 h 對(duì)照組基因表達(dá)不同時(shí)間點(diǎn)無(wú)明顯變化，實(shí)驗(yàn)組基因表達(dá)顯著強(qiáng)于對(duì)照組，于12 h 時(shí)作用最明顯，其中12.50% 濃度組強(qiáng)于其他各濃度組。 結(jié)論 PRP 能明顯促進(jìn)體外培養(yǎng)的兔SMSCs 向成骨方向分化，其作用效果與PRP濃度有關(guān)，12.50% PRP 作用效果較好。
引用本文： 單連成,王剛,張長(zhǎng)青,曾炳芳. 不同濃度PRP 對(duì)骨骼肌干細(xì)胞成骨分化的影響. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2009, 23(8): 991-996. doi: 復(fù)制
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