目的 探討體外快速培養(yǎng)犬膀胱平滑肌細胞的方法及觀察膀胱 平滑肌細胞在脫細胞小腸黏膜下層（small intestinal submucosa, SIS）上的生長狀況， 為構(gòu)建組織工程膀胱平滑肌組織提供實驗依據(jù)。方法 分別采用酶消化 法和組織塊培養(yǎng)法分離、獲取和原代培養(yǎng)犬膀胱平滑肌細胞，倒置相差顯微鏡下觀察細胞的 生長情況，透射電鏡觀察細胞的超微結(jié)構(gòu)，免疫組織化學染色進行細胞鑒定。將犬膀胱平滑 肌細胞接種到SIS支架材料上，于復合培養(yǎng)5、7及9d 取材，行蘇木素染色、石蠟切片HE 染色和掃描電鏡觀察膀胱平滑肌細胞在SIS上的生長狀況。以細胞SIS復合培養(yǎng)組為實驗組 ，以膀胱平滑肌細胞為對照組，每組各設(shè)9孔，分別于接種后3、5及7d取材，酶消化后收集 細胞并計數(shù)。結(jié)果酶消化法原代培養(yǎng)獲取犬膀胱平滑肌細胞數(shù)量 多， 細胞生長速度快，形態(tài)良好，培養(yǎng)5d細胞在培養(yǎng)瓶底生長匯合。組織塊培養(yǎng)法接種3d見長 梭形的膀胱平滑肌細胞從植塊邊緣萌出，獲取的細胞數(shù)量較少。透射電鏡下見膀胱平滑肌細 胞胞質(zhì)中有特征性細肌絲和細胞膜的密斑?？功?肌動蛋白免疫組織化學染色胞漿呈棕黃色 陽性反應(yīng)。膀胱平滑肌細胞在SIS表面能黏附、生長和增殖。體外復合培養(yǎng)5d后，膀胱平滑 肌細胞鋪滿SIS表面，呈單層細胞結(jié)構(gòu)。7、9d細胞形態(tài)與5d相似。實驗組3、5及7d的細 胞計數(shù)分別為（16.85±0.79）×105、（39.74±2.16）×105及（37.15±2.02）×10 5個，對照組分別為（19.43±0.54）×105、（34.50±1.85）×105及（33.07±1.31 ）×105個。兩組5d細胞計數(shù)差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結(jié)論 酶消化法原代培養(yǎng)膀胱平滑肌細胞可提供大量活性良好的種子細胞。SIS支持膀胱平滑 肌細胞黏附和生長，可為構(gòu)建組織工程膀胱平滑肌組織提供良好支架。

引用本文： 韓平,楊志明,智偉,李秀群,羅靜聰,解慧琪. 膀胱平滑肌細胞與小腸黏膜下層體外復合培養(yǎng)的實驗研究. 中國修復重建外科雜志, 2007, 21(12): 1366-1370. doi: 復制

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