目的 構(gòu)建β淀粉樣前體蛋白裂解酶（βsite amyloid precursor protein cleaving enzyme, BACE）基因的真核表達(dá)載體，為修復(fù)阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)損傷神經(jīng)元奠定基礎(chǔ)。方法 采用RT-PCR 方法，從人的成神經(jīng)細(xì)胞瘤的總cDNA中，擴(kuò)增出1.5 kb 的BACE cDNA片段，再用BamHI和XhoI雙酶切后定向克隆到真核細(xì)胞表達(dá)載體pcDNA3.1中，用限制性?xún)?nèi)切酶酶切分析和DNA序列分析鑒定重組質(zhì)粒；以免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)BACE基因的表達(dá)情況。結(jié)果 人BACE基因的cDNA已克隆到真核細(xì)胞表達(dá)載體pcDNA3.1質(zhì)粒中；經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞后，并由潮霉素進(jìn)行篩選，可見(jiàn)轉(zhuǎn)染細(xì)胞胞漿中和胞膜上有較高量的BACE蛋白表達(dá)。結(jié)論 成功構(gòu)建了pcDNA3.1-BACE的真核表達(dá)載體，為研究BACE基因在AD發(fā)病機(jī)制中的作用及抑制BACE，為治療AD奠定一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
引用本文： 董煒疆,宮惠琳,馮改豐,胡海濤. 真核表達(dá)載體pcDNA3.1-β淀粉樣前體蛋白裂解酶的構(gòu)建及其在COS-7細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá). 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2006, 20(4): 423-426. doi: 復(fù)制
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