目的 構(gòu)建腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）綠色熒光蛋白(GFP)融合表達(dá)質(zhì)粒，觀察其融合蛋白的特性。方法 將BDNF cDNA片段插入pcDNA3.1/NT-GFP-TOPO 真核表達(dá)質(zhì)粒，使其與GFP同處一個(gè)閱讀框架中，測(cè)序鑒定后，轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的雪旺細(xì)胞，用免疫組織化學(xué)和蛋白質(zhì)印跡(Western botting)觀察外源性目的蛋白的表達(dá)情況，并用該質(zhì)?；铙w轉(zhuǎn)染視神經(jīng)切斷的大鼠模型，觀察所表達(dá)外源性蛋白的神經(jīng)保護(hù)作用。結(jié)果 測(cè)序證實(shí)質(zhì)粒構(gòu)建成功。Western botting結(jié)果顯示，BDNF-GFP融合蛋白表達(dá)一相對(duì)分子質(zhì)量為41 times;103大小條帶。熒光顯微鏡下可見BDNF-GFP轉(zhuǎn)染的細(xì)胞發(fā)出綠色熒光，免疫組織化學(xué)染色后，可見綠色熒光與紅色熒光完全重合。轉(zhuǎn)染BDNF-GFP質(zhì)粒和GFP質(zhì)粒的大鼠視神經(jīng)切斷術(shù)后7 d存活視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（RGC）分別為（1201 plusmn;286）、（482 plusmn;151）個(gè) /mm2，存活百分比分別為（51.39 plusmn;12.24）%和（20.62 plusmn;6.46）%；28 d時(shí)存活的RGC分別為（715 plusmn;71）、（112 plusmn;24）個(gè)/mm2，存活百分比分別為（30.59 plusmn;3.04）%和（4.79 plusmn;1.03）%。兩組存活百分比比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.144，11.378；P＜0.01）。結(jié)論 BDNF-GFP融合表達(dá)載體可以轉(zhuǎn)錄翻譯為一融合蛋白，該蛋白可自發(fā)綠色熒光，并具有BDNF的生物學(xué)活性。
引用本文： 方媛,樊嘉雯,莫曉芬,孫興懷,郭文毅,孔德升,馬端,田潔. 腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-綠色熒光蛋白融合基因載體的構(gòu)建、鑒定及初步應(yīng)用研究. 中華眼底病雜志, 2009, 25(5): 372-375. doi: 復(fù)制
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