目的 檢測細(xì)胞因子對人視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細(xì)胞早期生長反應(yīng)基因-1(Egr-1)的影響。 方法 體外培養(yǎng)人RPE細(xì)胞,采用免疫熒光染色、Western blotting和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)定性定量觀察不同刺激因素作用下Egr-1蛋白和mRNA的表達(dá)變化。刺激因素包括:20 mu;g/ml脂多糖(LPS)、40 ng/ml腫瘤壞死因子(TNF) alpha;、10 U/ml 干擾素(IFN) gamma;、30%單核/巨噬細(xì)胞株(THP-1細(xì)胞)上清液和正常人玻璃體液分別刺激0(未受刺激)、10、20、30、40、60 min。結(jié) 果 在未受刺激的RPE細(xì)胞中Egr-1呈弱陽性表達(dá),細(xì)胞漿為淺黃綠色熒光,隨著刺激因素的作用,Egr-1的表達(dá)明顯增強(qiáng),細(xì)胞漿和部分細(xì)胞核呈強(qiáng)綠色熒光。20 mu;g/ml LPS、40 ng/ml TNF alpha;、10 U/ml IFN gamma;、30%THP-1細(xì)胞上清液和玻璃體液刺激RPE細(xì)胞后,與未受刺激的RPE細(xì)胞相比,Egr-1 mRNA的最大增強(qiáng)幅度分別為19、13、14、12、14倍,Egr-1蛋白的最大升高幅度分別為34、12、17、32、13倍。 結(jié)論 LPS、TNF alpha;、IFN gamma;、THP1細(xì)胞上清液和玻璃體液可上調(diào)體外培養(yǎng)的人RPE細(xì)胞Egr-1 mRNA和蛋白的表達(dá),且出現(xiàn)核轉(zhuǎn)位現(xiàn)象,說明這些刺激因素可引起Egr-1的活化。
引用本文: 王靜波,張延軍,惠延年. 細(xì)胞因子對培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞早期生長反應(yīng)基因-1的影響. 中華眼底病雜志, 2007, 23(6): 410-413. doi: 復(fù)制
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