目的 探討周期性力學(xué)刺激對(duì)體外培養(yǎng)的成肌細(xì)胞自身抗原表達(dá)的影響。 方法 取C2C12細(xì)胞根據(jù)處理方法不同分為實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組,其中實(shí)驗(yàn)組分為4個(gè)亞組,即2、4、6 d周期性拉伸組(2、4、6 d拉伸組)及1 d拉伸組。2、4、6 d拉伸組:細(xì)胞置于Flexercell 5000柔性基底加載系統(tǒng),以0.25 Hz拉伸頻率、10%拉伸幅度進(jìn)行每天2 h應(yīng)力加載,連續(xù)加載2、4、6 d;1 d拉伸組:細(xì)胞置于Flexercell 5000柔性基底加載系統(tǒng),以1 Hz拉伸頻率、15%拉伸幅度拉伸1 h,23 h后收集細(xì)胞;對(duì)照組:細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)1、2、4、6 d。培養(yǎng)期間于倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞增殖情況,Western blot檢測自身抗原DNA依賴蛋白激酶催化亞基(Ku/the catalytic subunit of DNA-dependent protein kinase,DNA-PKcs)、Mi-2(reconfigurable components deacetylase complexes of NuRD)、U1-70(A part of ATP-dependent DNA helicaseⅡ)、組氨酰-tRNA合成酶(histidyl tRNA synthetase,HRS)表達(dá)情況。 結(jié)果 經(jīng)培養(yǎng)后,1 d拉伸組可見脫落細(xì)胞,對(duì)照組1 d時(shí)無細(xì)胞脫落;2 d拉伸組細(xì)胞增殖較對(duì)照組2 d時(shí)明顯;4 d拉伸組細(xì)胞出現(xiàn)分化,6 d拉伸組細(xì)胞部分融合,與對(duì)照組4、6 d時(shí)情況一致。1 d拉伸組細(xì)胞經(jīng)單次拉伸后出現(xiàn)凋亡,相對(duì)DNA增殖指數(shù)(relative DNA proliferation index,DPI)與對(duì)照組1 d時(shí)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.346,P=0.747)。經(jīng)周期性拉伸后,2、4 d拉伸組DPI較對(duì)照組2、4 d時(shí)顯著提高(P lt; 0.05),6 d拉伸組與對(duì)照組6 d時(shí)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.191,P=0.303)。2 d拉伸組DNA-PKcs、Mi-2、HRS和U1-70蛋白相對(duì)表達(dá)量均較對(duì)照組2 d時(shí)明顯降低(P lt; 0.05); 4 d拉伸組與對(duì)照組4 d時(shí)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。4 d拉伸組各抗原蛋白相對(duì)表達(dá)量均較2 d拉伸組顯著增加(P lt; 0.05),而對(duì)照組4 d 時(shí)均較2 d時(shí)顯著降低(P lt; 0.05)。 結(jié)論 短期力學(xué)刺激可以抑制成肌細(xì)胞自身抗原表達(dá),但隨時(shí)間延長,細(xì)胞分化融合以及對(duì)力學(xué)刺激的適應(yīng)使其對(duì)自身抗原表達(dá)抑制作用減弱。