目的構(gòu)建人CD59真核表達載體pSecTag2/HygroB-CD59，并利用殼聚糖（chitosan）組裝成納米微粒復合體，轉(zhuǎn)染小鼠NIH3T3細胞。方法應(yīng)用PCR方法，從CD59-pGEM-T Easy Vector克隆相關(guān)的DNA序列，插入到具有相應(yīng)酶切位點的真核表達載體pSecTag2/HygroB中，構(gòu)建pSecTag2/HygroB-CD59真核表達質(zhì)粒，并進行酶切鑒定及序列測定。利用殼聚糖包裹質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染小鼠NIH3T3細胞，并用抗CD59抗體對轉(zhuǎn)染細胞進行免疫組織化學染色。結(jié)果CD59基因大小為312 bp，與Genbank中記載的人CD59 cDNA序列結(jié)果完全一致。利用殼聚糖-CD59納米微粒轉(zhuǎn)染NIH3T3細胞24 h后，免疫組織化學染色顯示轉(zhuǎn)染細胞CD59呈彌漫性胞漿陽性。結(jié)論成功構(gòu)建了人CD59真核表達載體并通過殼聚糖介導轉(zhuǎn)染NIH3T3細胞，為進一步探討及研究轉(zhuǎn)基因肝臟奠定了基礎(chǔ)。