目的研究恒河猴BMSCs在缺氧再給氧環(huán)境下對新生豬胰島活性和功能的保護作用。 方法取健康成年恒河猴5只，體重6～10 kg，取骨髓采用骨髓單核細胞貼壁培養(yǎng)法篩選獲得BMSCs；取3～5日齡新生長白豬5 只，取胰腺以Ⅴ型膠原酶消化制備新生豬胰島。將實驗分為胰島正常組（A組）、胰島加BMSCs正常組（B組）、胰島缺氧再給氧組（C組）、胰島加BMSCs缺氧再給氧組（D組），觀察比較常規(guī)培養(yǎng)和缺氧（1%O2）12 h再給氧24 h或48 h條件下，胰島的功能活性變化：二乙酸熒光素/碘化丙啶（propidium iodide，PI）染色計算胰島成活率；細胞計數(shù)試劑盒8法檢測新生豬胰島的代謝活性；膜聯(lián)蛋白V-FITC/PI標記后流式細胞儀檢測胰島凋亡率；葡萄糖刺激法分析胰島功能糖刺激指數(shù)（stimulation index，SI）。 結果C組較A、B組胰島團更為分散，死亡細胞增多；D組較C組胰島團完整，成活率更高。A、B、C、D組胰島成活率分別為90.2% ± 9.1%、88.3% ± 5.9%、52.3% ± 12.1%、71.4% ± 11.5%，C、D組顯著低于A、B組（P lt; 0.05），D組顯著高于C組（P lt; 0.05）。D組BMSCs以1∶10和1∶20比例與胰島缺氧再給氧共培養(yǎng)后，代謝活性顯著高于C組（P lt; 0.05）。A、B、C、D組胰島凋亡率分別為27.1% ± 3.2%、24.0% ± 1.0%、64.3% ± 1.8%、46.2% ± 1.4%，C、D組顯著高于A、B組（P lt; 0.05），但D組顯著低于C組（P lt; 0.05）。各時間點A、B組SI比較差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05），C組顯著低于A、B組（P lt; 0.05），在24 h和72 h時D組顯著高于C組（P lt; 0.05）。 結論BMSCs對缺氧再給氧誘導的新生豬胰島活性和功能損傷具有保護作用。
目的 建立恒河猴外周血CD4+CD25+調節(jié)性T淋巴細胞（regulatory T cells，Tregs）快速有效的分離純化方法。 方法4～5歲健康恒河猴10只，雌性4只，雄性6只，體重5～8 kg；于大隱靜脈抽取外周血，每只抽取8 mL。密度梯度離心法分離外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），分別采用非人靈長類Tregs分離試劑盒的生物素標記的混合抗體和磁珠標記的抗生物素抗體陰性分選，以及大鼠抗人CD4-活化蛋白C（activated protein C，APC）和抗APC多選試劑盒中的磁珠標記的抗APC抗體陽性分選出 CD4+ T淋巴細胞，比較兩種方法獲得細胞的得率、活性及純度；選擇得率、活性和純度較高的分選方法獲得的CD4+ T淋巴細胞，用磁珠標記的抗人CD25抗體進行陽性分選，獲得 CD4+CD25+ Tregs，流式細胞儀檢測純度、活性及FoxP3表達水平，以及Tregs對刀豆蛋白（concanavalin A，ConA）刺激的自體CD4+CD25-效應性T淋巴細胞（effective T cells，Teffs）增殖的抑制功能。 結果CD4+ T淋巴細胞陽性分選和陰性分選后，細胞活性均達95%左右，差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05），但陽性分選后CD4+ T淋巴細胞得率和純度均顯著高于陰性分選（P lt; 0.05）。后續(xù)CD4+CD25+ Tregs分選采用陽性分選法獲得的CD4+ T淋巴細胞。經雙陽性分選收集的目的細胞中CD4+CD25+ Tregs占76.2% ± 8.6%，活細胞比例為93.3% ± 4.7%，F(xiàn)oxP3陽性細胞比例為74.2% ± 6.9%?；旌吓囵B(yǎng)后Tregs均對ConA刺激的Teffs的增殖有抑制作用。 結論免疫磁珠雙陽性分選法能有效分選出恒河猴外周血中有功能的CD4+CD25+ Tregs。