目的 通過研究Runt相關轉(zhuǎn)錄因子1（Runt-related transcription factor 1，RUNX1）在經(jīng)卷煙煙霧提取物（cigarette smoking extract，CSE）刺激的大鼠氣道上皮細胞中的表達，探討RUNX1對上皮–間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的調(diào)控作用。方法 采用酶消化法提取大鼠的原代支氣管上皮細胞，并用不同濃度的CSE進行刺激，采用CCK-8檢測細胞的活性，探索合適的CSE處理濃度。用CSE處理細胞后，構建RUNX1干擾和過表達載體，轉(zhuǎn)染入細胞，使RUNX1基因沉默或過表達，用免疫細胞化學法檢測RUNX1蛋白的表達，用蛋白印跡法檢測RUNX1、核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）、轉(zhuǎn)錄因子Snail、上皮細胞標志物E-鈣黏蛋白（E-cadherin，E-cad）以及間質(zhì)細胞標志物波形蛋白（vimentin，VIM）的表達。結果 支氣管上皮細胞的活力可被CSE降低，且降低程度與CSE的濃度成正比。通過CSE的誘導，原代大鼠支氣管上皮細胞E-cad表達水平顯著降低（P<0.05），RUNX1、NF-κB、Snail、VIM的表達水平明顯升高（均P<0.05）。干擾RUNX1基因后，E-cad表達上調(diào)（P<0.05），NF-κB、Snail、VIM的表達下調(diào)（均P<0.05）。而過表達RUNX1后，E-cad的表達下調(diào)（P<0.05），NF-κB、Snail、VIM的表達上調(diào)（均P<0.05）。結論 CSE可促進氣道上皮細胞RUNX1的表達，RUNX1通過NF-κB/Snail通路調(diào)控EMT的進程。
目的 探討大鼠低氧性肺動脈高壓( HPH) 形成過程中小泛素蛋白樣修飾蛋白1( SUMO-1) 在肺內(nèi)表達的動態(tài)變化規(guī)律及在HPH 發(fā)病機制中的作用。方法 40 只Wistar 大鼠隨機分為常氧對照組、低氧3 d 組、低氧7 d組、低氧14 d 組及低氧21 d 組, 每組8 只。常壓間斷低氧暴露復制HPH大鼠模型。檢測各組大鼠的平均肺動脈壓( mPAP) 、右心室肥大指數(shù)( RVHI) 、血管形態(tài)學指標[ 管壁面積/ 管總面積( WA%) ] ; 原位雜交、RT-PCR 檢測肺內(nèi)SUMO-1 mRNA 表達, 免疫組化、Western blot 檢測其蛋白表達水平。結果 低氧7 d至21 d, 大鼠肺小動脈開始出現(xiàn)明顯血管重塑并逐漸加重, 低氧7 d 時WA% 和mPAP 顯著高于對照組; 低氧14 d 時WA% 、mPAP 較7 d 時進一步增加, RVHI顯著高于對照組; 低氧21 d 時WA% 、RVHI 較14 d 時進一步增加。SUMO-1 mRNA 和蛋白在對照組肺小動脈壁呈弱陽性表達; 低氧3 d 后顯著增高; 低氧14 d 達高峰; 低氧21 d 后mRNA 表達減弱但仍然高于對照組, 蛋白表達繼續(xù)保持高水平。SUMO-1 mRNA 和蛋白表達與mPAP、WA% 、RVHI 均呈正相關( P 均lt;0. 01) 。結論 慢性低氧誘導肺內(nèi)SUMO-1 表達增加在HPH 的發(fā)病過程中發(fā)揮一定的作用。