lt;brgt;目的 lt;brgt;探討體外培養(yǎng)的Muuml;ller細(xì)胞在糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）作用下增殖活性的變化，以及這種改變對(duì)牛視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞（BREC）緊密連接蛋白（occludin）表達(dá)的影響。 lt;brgt;方法 lt;brgt;培養(yǎng)新生大鼠Muuml;ller細(xì)胞和BREC，兩類細(xì)胞均用特異性抗體進(jìn)行免疫鑒定。將培養(yǎng)的BREC分4組觀察：第1組未添加任何細(xì)胞上清液；第2組添加正常Muuml;ller細(xì)胞上清液；第3組添加糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)作用后的Muuml;ller細(xì)胞上清液；第 lt;brgt;4組無細(xì)胞組，為空白對(duì)照組。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定4組細(xì)胞上清液中緊密連接蛋白的含量，比較其變化。 lt;brgt;結(jié)果 lt;brgt;添加正常Muuml;ller細(xì)胞上清液組緊密連接蛋白表達(dá)量最多，未添加任何細(xì)胞上清液組次之，添加AGEs作用后的Muuml;ller細(xì)胞上清液組更少。 lt;brgt;結(jié)論 lt;brgt;AGEs能促進(jìn)Muuml;ller細(xì)胞異常增殖、抑制BREC表達(dá)緊密連接蛋白。 lt;brgt;(中華眼底病雜志, 2006, 22: 28-30)
目的 觀察體外孵育的牛血清白蛋白(BSA)非酶促糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）對(duì)牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞（BREC）和周細(xì)胞（BRP）存活和形態(tài)的影響。 方法 取終濃度為50mg/ml的牛血清白蛋白（BSA）、500 mmol/L D-葡萄糖，于37℃孵箱內(nèi)避光孵育12周，制備外源性AGEs-BSA，經(jīng)Sephacryl S-300層析純化，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）蛋白電泳鑒定AGEs-BSA和coomassie 蛋白質(zhì)定量法測定蛋白濃度。分設(shè)不同濃度梯度的AGEs-BSA實(shí)驗(yàn)組和BSA對(duì)照組，以及空白對(duì)照組，分別觀察體外孵育的AGEs-BSA對(duì)體外培養(yǎng)的BREC和BRP的毒性作用。相差倒置顯微鏡觀察500mu;g/ml AGEs-BSA和BSA作用48 h對(duì)BREC和BRP形態(tài)的影響。 結(jié)果 隨著AGEs-BSA劑量的增加，細(xì)胞被抑制呈上升趨勢。500mu;g/ml AGEs-BSA抑制BREC為空白對(duì)照組的（72.8plusmn;15.9）%，抑制周細(xì)胞為空白對(duì)照組的（64.8plusmn;9.0）%。低濃度AGEs-BSA對(duì)BREC有一定促增生作用，但與空白對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.231）。相差倒置顯微鏡觀察結(jié)果顯示AGEs-BSA處理組細(xì)胞增殖受抑制，失去正常細(xì)胞形態(tài)，而BSA對(duì)照組細(xì)胞同空白對(duì)照組，細(xì)胞形態(tài)正常。 結(jié)論 AGEs-BSA在高濃度時(shí)，無論是對(duì)BREC還是BRP，都產(chǎn)生生長抑制作用，從而導(dǎo)致BRP的丟失，損傷血管功能。進(jìn)一步證實(shí)了非酶糖化是糖尿病微血管并發(fā)癥的一個(gè)重要原因。 (中華眼底病雜志, 2006, 22: 11-15)
目的 研究糖基化終產(chǎn)物（AGEs）對(duì)體外培養(yǎng)的牛視網(wǎng)膜毛細(xì)血管周細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期和轉(zhuǎn)化生長因子beta;（TGF-beta;）表達(dá)的影響。 方法 分別應(yīng)用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色分析法檢測周細(xì)胞的增殖、流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期、免疫熒光染色法觀察TGF-beta;蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 AGEs能抑制體外培養(yǎng)的牛視網(wǎng)膜毛細(xì)血管周細(xì)胞的增殖；并可使細(xì)胞周期阻滯于S期，凋亡細(xì)胞數(shù)顯著增多（Plt;0.01）；能促進(jìn)周細(xì)胞TGF-beta;蛋白的表達(dá)。 結(jié)論 AGEs可通過抑制周細(xì)胞增殖，促進(jìn)周細(xì)胞的凋亡而導(dǎo)致周細(xì)胞數(shù)量的減少；并可能促進(jìn)周細(xì)胞分泌TGF-beta;而進(jìn)一步加速糖尿病視網(wǎng)膜病變。 (中華眼底病雜志, 2006, 22: 20-23)
目的 通過測量糖基化終產(chǎn)物對(duì)培養(yǎng)的牛視網(wǎng)膜毛細(xì)血管周細(xì)胞抗氧化物酶和脂質(zhì)過氧化物含量的影響, 以探討氧化應(yīng)激在糖尿病視網(wǎng)膜病變進(jìn)程中的作用。 方法 不同濃度的糖基化終產(chǎn)物（0，8，32，125，500，2 000 μg/ml）與周細(xì)胞作用4 d后，以分光光度法測量細(xì)胞內(nèi)過氧化氫酶的活性及過氧化脂質(zhì)丙二醛的含量。 結(jié)果 糖基化終產(chǎn)物能以劑量依賴的方式降低周細(xì)胞內(nèi)過氧化氫酶的活性(r=-0.714, P＜0.01)，增加丙二醛的含量(r=0.748, P＜0.01)，與對(duì)照組相比，當(dāng)糖基化終產(chǎn)物濃度達(dá)到32 μg/ml時(shí)，兩者比較差異有顯著性的意義（P＜0.01）。 結(jié)論 氧化應(yīng)激的增加可能是早期糖尿病視網(wǎng)膜病變中周細(xì)胞喪失的原因之一。 (中華眼底病雜志, 2002, 18: 143-145)
目的 探討糖基化產(chǎn)物對(duì)牛視網(wǎng)膜周細(xì)胞(pericyte,PC)增生和胞漿［Ca2+］i水平的影響。 方法 采用細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)合噻唑藍(lán)比色測定，氚標(biāo)胸腺嘧啶核苷(3H-thymidine，3H-TdR)摻入和鈣熒光探劑(Fura-2Acetoxymethyl ester，F(xiàn)ura-2AM)，研究PC在牛血清白蛋白早期糖基化產(chǎn)物( early glycation products of bovine serum albumin,EG-BSA)和牛血清白蛋白糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation end products of bovine serum albumin,AGE-BSA)培養(yǎng)下，PC增生數(shù)、DNA合成量及胞漿［Ca2+］i水平的改變。 結(jié)果 培養(yǎng)4 d后，細(xì)胞計(jì)數(shù)法：EG-BSA和AGE-BSA組PC數(shù)分別為17.87plusmn;2.36 ，14.77plusmn;3.72,較其對(duì)照組(20.54plusmn;0.82,20.31plusmn;0.93)減少13．00%和27．00%(Plt;0.01)；MTT法：EG-BSA和AGE-BSA組分別為0.4619plusmn;0.0946,0.3884plusmn;0.1013，較其對(duì)照組(0.5236plusmn;0.0539,0.5227plusmn;0.0519)減少12．00%和25.70%(Plt;0.01)；3H-TdR摻入量：EG-BSA和AGE-BSA組分別為39450.16plusmn;8870．68，33667．85plusmn;10581．70，較其對(duì)照組(56373.63plusmn;2317.97,56542.04plusmn;1961.23)減少30．00%和40.46%(P＜0.01)；胞漿［Ca2+］i水平：EG-BSA和AGE-BSA組分別為(129.55plusmn;30.41) nmol/L, (179.71plusmn;56.69) nmol/L,較其對(duì)照組［(79.70plusmn;6.94) nmol/L,(83.96plusmn;6.39) nmol/L ］增 高163．00%和214．00%(P＜0.01)。 結(jié)論 EG-BSA和AGE-BSA能不同程度地抑制視網(wǎng)膜微血管PC增生和DNA合成，并使胞漿［Ca2+］i水平增高，尤以AGE-BSA為著。 （中華眼底病雜志，2000，16：139-212）