目的 探討周期性力學刺激對體外培養(yǎng)的成肌細胞自身抗原表達的影響。 方法 取C2C12細胞根據(jù)處理方法不同分為實驗組及對照組,其中實驗組分為4個亞組,即2、4、6 d周期性拉伸組(2、4、6 d拉伸組)及1 d拉伸組。2、4、6 d拉伸組:細胞置于Flexercell 5000柔性基底加載系統(tǒng),以0.25 Hz拉伸頻率、10%拉伸幅度進行每天2 h應力加載,連續(xù)加載2、4、6 d;1 d拉伸組:細胞置于Flexercell 5000柔性基底加載系統(tǒng),以1 Hz拉伸頻率、15%拉伸幅度拉伸1 h,23 h后收集細胞;對照組:細胞常規(guī)培養(yǎng)1、2、4、6 d。培養(yǎng)期間于倒置相差顯微鏡下觀察細胞生長情況。采用流式細胞儀檢測細胞增殖情況,Western blot檢測自身抗原DNA依賴蛋白激酶催化亞基(Ku/the catalytic subunit of DNA-dependent protein kinase,DNA-PKcs)、Mi-2(reconfigurable components deacetylase complexes of NuRD)、U1-70(A part of ATP-dependent DNA helicaseⅡ)、組氨酰-tRNA合成酶(histidyl tRNA synthetase,HRS)表達情況。 結(jié)果 經(jīng)培養(yǎng)后,1 d拉伸組可見脫落細胞,對照組1 d時無細胞脫落;2 d拉伸組細胞增殖較對照組2 d時明顯;4 d拉伸組細胞出現(xiàn)分化,6 d拉伸組細胞部分融合,與對照組4、6 d時情況一致。1 d拉伸組細胞經(jīng)單次拉伸后出現(xiàn)凋亡,相對DNA增殖指數(shù)(relative DNA proliferation index,DPI)與對照組1 d時比較,差異無統(tǒng)計學意義(t=0.346,P=0.747)。經(jīng)周期性拉伸后,2、4 d拉伸組DPI較對照組2、4 d時顯著提高(P lt; 0.05),6 d拉伸組與對照組6 d時比較差異無統(tǒng)計學意義(t=1.191,P=0.303)。2 d拉伸組DNA-PKcs、Mi-2、HRS和U1-70蛋白相對表達量均較對照組2 d時明顯降低(P lt; 0.05); 4 d拉伸組與對照組4 d時比較差異均無統(tǒng)計學意義(P gt; 0.05)。4 d拉伸組各抗原蛋白相對表達量均較2 d拉伸組顯著增加(P lt; 0.05),而對照組4 d 時均較2 d時顯著降低(P lt; 0.05)。 結(jié)論 短期力學刺激可以抑制成肌細胞自身抗原表達,但隨時間延長,細胞分化融合以及對力學刺激的適應使其對自身抗原表達抑制作用減弱。