目的 構(gòu)建人flag-AWP1（associated with protein kinase C related kinase 1）基因的重組腺病毒載體作為AWP1的轉(zhuǎn)基因工具，研究AWP1在人血管內(nèi)皮細胞ECV304中的表達與定位。方法 將flag-AWP1基因亞克隆到腺病毒穿梭載體pAdTrack-CMV，經(jīng)酶切鑒定正確后PmeⅠ線性化,轉(zhuǎn)化至帶有骨架質(zhì)粒pAdEasy-1的大腸桿菌BJ5183中進行重組； 經(jīng)PacⅠ酶切鑒定和 PCR鑒定、線性化后，用Lipofectamine轉(zhuǎn)染293細胞進行包裝、反復(fù)感染以獲取高滴度重組病毒上清。再用獲得的重組腺病毒Ad-flag-AWP1感染ECV304細胞，激光掃描共焦顯微鏡下觀察AWP1在ECV304細胞中的表達與定位。結(jié)果 包裝病毒顆粒的PCR分析顯示，成功獲得了重組腺病毒Ad-flag-AWP1，該重組腺病毒能夠高效感染ECV304細胞，并在激光掃描共焦顯微鏡下觀察到AWP1在細胞內(nèi)成功表達，且定位于細胞膜內(nèi)側(cè)。結(jié)論 成功構(gòu)建了flag-AWP1的重組腺病毒基因轉(zhuǎn)染載體，AWP1在ECV304細胞中的表達與定位提示AWP1可能具有細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子的潛能，尚需進一步研究。