【摘要】目的探討一氧化氮（NO）在大鼠梗阻性黃疸腎功能損害發(fā)生中的作用，以及褪黑素（melatonin,Mel)的保護作用。方法64只雄性SD大鼠隨機均分為4組： 正常對照組（CN組）、假手術組（SO組）、膽總管結扎組（BLD組）和褪黑素治療組（BDL+Mel組）。應用膽總管結扎法建立梗阻性黃疸模型，分別于手術后第4天和第8天兩個時間點檢測4組中血漿NO、TB、DB、ALT、AST、BUN、Cr水平以及腎組織中NO水平和iNOS活性； 光鏡下觀察腎組織病理形態(tài)改變。結果BDL組大鼠血漿NO、TB、DB、ALT、AST、BUN、Cr水平和腎組織NO水平及iNOS活性明顯升高（P＜0.01），褪黑素治療可使血漿NO、ALT、AST、BUN及Cr水平和腎組織中NO水平及iNOS活性顯著降低，與BDL組比較差異有顯著性意義（P＜0.01）。結論梗阻性黃疸時，腎組織iNOS活性增強，NO大量產(chǎn)生參與了腎功能損害的發(fā)生、發(fā)展； 褪黑素對大鼠梗阻性黃疸腎損害的保護作用至少部分是通過干擾NO通路實現(xiàn)的。
目的 研究褪黑素對大鼠腸缺血再灌注肺損傷的保護作用及其對N-myc 下游調(diào)節(jié)基因2( NDRG2) 表達的影響。方法 將健康雄性SD 大鼠40 只隨機分為褪黑素高劑量組( 10 mg/kg) 、褪黑素低劑量組( 1 mg/kg) 、缺血再灌注組和假手術組。褪黑素高、低劑量組造模前30 min給予腹腔注射褪黑素, 缺血再灌注組和假手術組造模前30 min 腹腔注射與褪黑素治療量等容量的生理鹽水。褪黑素高、低劑量組和缺血再灌注組大鼠經(jīng)夾閉腸系膜上動脈, 缺血60 min后松開動脈夾造成再灌注, 建立腸缺血再灌注肺損傷模型, 于再灌注45 min 后取右肺組織。假手術組全身麻醉后只切除右肺, 縫合切口。觀察肺組織病理學改變和濕/干重比值( W/D) , 免疫組化、Western-blot 方法觀察大鼠肺組織NDRG2 的表達。結果 與假手術組比較, 缺血再灌注組肺泡壁增寬, 肺泡腔內(nèi)可見出血等炎癥表現(xiàn), W/D 顯著升高, 肺組織NDRG2 蛋白表達明顯降低。與缺血再灌注組比較, 褪黑素高、低劑量組肺泡腔內(nèi)出血等炎癥表現(xiàn)減輕,W/D顯著降低, 肺組織NDRG2 蛋白表達明顯增強。褪黑素高、低劑量組間各指標均無顯著差異。結論 褪黑素可能通過上調(diào)NDRG2 的表達而減輕腸缺血再灌注造成的肺損傷。
目的 褪黑素可提高軟骨生長因子的表達，刺激軟骨基質(zhì)的合成；通過觀察注射褪黑素后大鼠骨性關節(jié)炎（osteoarthritis，OA）關節(jié)軟骨中BMP-2 和IL-1β 的表達，探討褪黑素對損傷軟骨的防治作用。 方法 SPF 級4 周齡SD 雄性大鼠40 只，體重120 ～ 150 g，隨機分為4 組，每組10 只。正常對照組（A 組）大鼠不作任何處理。OA 模型組（B組）、OA 模型/ 去松果體模型組（C 組）、OA 模型/ 去松果體模型/ 褪黑素治療組（D 組）于大鼠左膝關節(jié)腔內(nèi)注射0.2 mL濃度為4% 的木瓜蛋白酶溶液，每2 天1 次，共2 周，制備大鼠OA 模型。木瓜蛋白酶注射2 周后，將C、D 組大鼠置于持續(xù)24 h（光照度為500 lx）光照環(huán)境中，制備去松果體模型。D組于制備去松果體模型第2 天開始于左膝關節(jié)腔內(nèi)注射0.2 mL濃度為20 mg/mL 的褪黑素溶液，每周4 次，共4 周。在最后1 次注射褪黑素1 周后，抽取A、B、C 組大鼠心尖處血液應用ELISA 法檢測血清褪黑素水平；之后處死各組動物，取材行大體觀察、組織學及免疫組織化學染色觀察。 結果 模型制備后大鼠均存活。A、B、C 組相同時間點血清中褪黑素水平比較以及同組各時間點比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。A 組關節(jié)軟骨表面光滑平整，有彈性；軟骨細胞排列整齊。B、C 組關節(jié)軟骨表面粗糙，局部區(qū)域軟骨面可見缺損及軟骨下骨外露現(xiàn)象；軟骨細胞排列及結構較紊亂。D 組關節(jié)軟骨表面較B、C 組平整，軟骨缺損及外露現(xiàn)象減少；軟骨細胞排列及結構較整齊。各組組織學及BMP-2、IL-1β 免疫組織化學染色觀察Mankin 評分及積分吸光度值比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。 結論 持續(xù)光照能加速大鼠OA 關節(jié)軟骨的退變。采用0.2 mL 濃度為20 mg/mL 的褪黑素溶液于關節(jié)腔注射4 周后能夠延緩大鼠OA 的進一步退變，其作用機制可能與上調(diào)軟骨生長因子BMP-2 及下調(diào)炎性因子IL-1β 表達有關。
目的 探討褪黑素（MLT）對視網(wǎng)膜母細胞瘤(RB)HXO-RB44細胞增生活性的影響及相關機制。方法 利用四氮唑化合物（MTT）比色法，觀察不同濃度的MLT對RB HXO-RB44細胞增生活性的影響；利用10-10、10-9、10-8、10-7 mmol/L的MLT對RB HXO-RB44分別進行干預，采用Hoechst熒光染色觀察細胞凋亡的形態(tài)學變化；利用流式細胞儀測定不同濃度的MLT干預24 h后，RB HXO-RB44細胞內(nèi)活性氧（ROS）的表達、細胞周期與凋亡情況。結果 濃度為10-7 mmol/L以下的MLT對HXO-RB44細胞并無抑制作用（P值均＞0.05）。10-6 mmol/L以上的MLT能夠顯著抑制HXO-RB44細胞增生（P＜0.01）。濃度為10-6、10-5、10-4 mmol/L的MLT干預后，隨藥物濃度的升高，HXO-RB44細胞內(nèi)ROS的表達逐漸升高。Hoechst染色顯示：不同濃度的褪黑素分別作用于培養(yǎng)的HXO-RB44細胞4、8、12、24 h后，細胞核固縮、核碎裂增多，細胞凋亡的程度隨著MLT濃度的增大而加重。流式細胞儀檢測：藥物干預后，G0/G1期細胞明顯增多，S期細胞減少，G2/M期細胞相對增多，隨著MLT濃度的升高，HXO-RB44細胞凋亡率明顯升高。結論 濃度大于10-6 mmol/L的MLT能夠有效地抑制HXO-RB44細胞增生，其抑制效率隨藥物濃度的升高和作用時間的延長而增強；MLT的抗細胞增殖作用可能與其誘導HXO-RB44細胞內(nèi)的活性氧產(chǎn)生、阻滯細胞周期于G0/G1期并誘導細胞凋亡有關。
目的 系統(tǒng)評價腫瘤患者進行化療或放療時，采用褪黑素進行輔助治療的有效性和安全性。方法 計算機檢索MEDLINE（1980～2010.1）、Cochrane圖書館（2009年第4期）、萬方數(shù)據(jù)庫（1980～2010.1）、VIP（1980～2010.1）、CNKI（1980～2010.1）、ELSEVIER ScienceDirect（SDOS）（1980～2010.1）、Nature（1980～2010.1）以及在研臨床試驗數(shù)據(jù)庫（www.clinicaltrials.gov和www.controlled-trials.com），納入研究外源性褪黑素輔助治療腫瘤效果的隨機對照試驗，由兩位研究者進行資料提取和質(zhì)量評價后，采用Stata 10.1軟件進行Meta分析。結果 共納入8個RCT。Meta分析結果顯示：褪黑素能顯著提高腫瘤患者的疾病緩解率［RR=1.98，95% CI（1.52，2.58）］及1年生存率［RR=1.90，95%CI（1.28，2.83）］，同時能顯著減輕化療或放療對骨髓抑制的毒性作用［RR=0.12，95%CI（0.06，0.27）］；治療期間未見褪黑素相關不良反應的報道。結論 當前證據(jù)顯示，褪黑素作為腫瘤的輔助治療藥物，對提高患者疾病緩解率、減輕化療放療的毒性、延長患者的壽命具有一定作用。受納入研究質(zhì)量限制，上述結論尚需開展更多高質(zhì)量研究驗證。
目的 探討氧化性損傷在大鼠梗阻性黃疸肝功能損害發(fā)生中的作用以及褪黑素對其的保護作用。方法 成年雄性SD大鼠64只，采用完全隨機化法隨機分為正常對照組（CN組，n=16）、假手術組（SO組，n=16）、膽總管結扎組（BDL組，n=16）和膽總管結扎＋褪黑素治療組（BDL＋MT組，n=16）。應用膽總管結扎法建立梗阻性黃疸模型，褪黑素治療組大鼠手術前1d至手術后7d連續(xù)腹腔注射褪黑素0.5mg/（kg·d），每日10∶00給藥。分別于手術后第4d和第8d兩個時間點采集標本，檢測血漿中總膽紅素（TBIL）、丙氨酸轉氨酶（ALT）、門冬氨酸轉氨酶（AST）、堿性磷酸酶（AKP）及γ-谷氨酰轉肽酶（GGT）水平變化，比色法測定肝組織勻漿中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）含量或活力變化，采用TUNEL法檢測肝組織細胞凋亡，并計算肝細胞凋亡指數(shù)（AI）。結果 與CN組和SO組比較，BDL組大鼠血漿TBIL、ALT、AST、AKP、GGT水平和肝組織MDA含量明顯升高（P＜0.05，P＜0.01），SOD、CAT、GSH-Px活力或GSH含量顯著降低（P＜0.01），AI增加（P＜0.01）； 褪黑素治療可使血漿TBIL、ALT、AST、AKP、GGT和肝組織MDA含量顯著降低，SOD、CAT、GSH-Px活力或GSH含量明顯升高（P＜0.01），AI減少（P＜0.01）。BDL組肝組織MDA含量與血漿TBIL、ALT、AKP、AST、GGT水平均呈顯著正相關（P＜0.01），GSH、SOD、CAT、GSH-Px與血漿TBIL、ALT、AKP、ALT、AST水平分別均呈顯著負相關（P＜0.01）；BDL組肝組織MDA含量的變化與AI呈正相關（P＜0.01），而GSH含量及SOD、CAT、GSH-Px活力分別與AI呈負相關（P＜0.01）。結論 大鼠梗阻性黃疸時，肝組織自由基大量產(chǎn)生介導的氧化性損傷及其細胞凋亡，參與了肝功能損害的發(fā)生、發(fā)展。褪黑素對大鼠梗阻性黃疸肝功能損害有一定程度的保護作用，其機制可能與其拮抗肝組織過氧化和細胞凋亡有關。
目的 研究胰膽管合流異常（PBM）膽道損傷的抗氧化治療的效果。方法 選取13只健康雜種貓，建立PBM動物模型后隨機分為2組：7只不進行抗氧化治療（非抗氧化治療組），6只行抗氧化治療（抗氧化治療組）；以動物建模術前情況作為對照。建模術后飼養(yǎng)6個月觀察膽囊組織的病理學改變，檢測過氧化產(chǎn)物丙二醛（maleic dialdehyde，MDA）的變化情況、PCNA的表達情況以及膽汁淀粉酶水平。結果 13只動物建模后均存活6個月。非抗氧化治療組較正常對照組膽管增粗，膽囊壁增厚，膽囊內(nèi)膽汁稠厚；抗氧化治療組和非抗氧化治療組相比上述改變無明顯不同。光鏡下見正常對照組的膽囊黏膜呈指狀，黏膜數(shù)目少，無增生； 非抗氧化治療組的膽囊黏膜增生及炎性細胞浸潤，部分纖維組織增生。電鏡下見正常對照組的膽囊黏膜上皮細胞排列緊密、規(guī)則；非抗氧化治療組膽囊黏膜上皮細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張成囊狀，細胞間隙增寬，細胞核變形；抗氧化治療組的上述改變較非抗氧化治療組好轉。膽汁淀粉酶正常對照組為（203.02±65.04）?U，非抗氧化治療組為（9 368.09±2 204.42）?U，抗氧化治療組為（8 746.25±2 077.95）?U，后2組高于正常對照組（P=0.003），但后２組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P=0.642）。PCNA表達陽性細胞所占百分比正常對照組為（7.29±2.71）%，非抗氧化治療組為（54.71±10.90）%，抗氧化治療組為（48.17±13.06）%，3組間相比差異有統(tǒng)計學意義（F=48.11，P=0.001）， 其中非抗氧化治療組高于抗氧化治療組（P=0.001）。MDA正常對照組為（1.095±0.653）?nmol/mg prot，非抗氧化治療組為（2.745±1.533）nmol/mg prot，抗氧化治療組為（1.302±0.771）?nmol/mg prot， 3組間相比差異有統(tǒng)計學意義（F=5.17，P=0.017），其中非抗氧化治療組高于抗氧化治療組（P=0.017）。結論 抗氧化治療對PBM有效。
子宮內(nèi)膜癌是女性生殖道三大惡性腫瘤之一，病因迄今尚不明確，可能的危險因素有：肥胖、高血壓、糖尿病、外源性雌激素的增加、高雌激素導致的初潮提前和絕經(jīng)推后、卵巢腫瘤等。褪黑素作為一種主要由松果體分泌的神經(jīng)內(nèi)分泌激素，有調(diào)節(jié)睡眠/覺醒周期、免疫調(diào)節(jié)、細胞凋亡調(diào)節(jié)及抗氧化等多種生理功能。由于其抗氧化、免疫刺激、誘導凋亡等特性，在許多腫瘤的抑制和治療上有一定效果。同時還具有調(diào)節(jié)血脂、血壓、血糖，調(diào)節(jié)卵巢功能，抑制子宮內(nèi)膜增生和子宮內(nèi)膜癌細胞增殖，恢復子宮內(nèi)膜等作用。因此，褪黑素水平的降低會增加子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病風險，且對其治療有一定作用。現(xiàn)就褪黑素對子宮內(nèi)膜癌的影響作一綜述。
目的 應用 meta 分析評價外源性褪黑素及其類似物預防危重癥患者譫妄的效果。方法 計算機檢索 Cochrane Library、PubMed、Web of Science、Embase、中國知網(wǎng)、維普、萬方、中國生物醫(yī)學文獻數(shù)據(jù)庫中的外源性褪黑素及其類似物治療危重癥患者譫妄效果的隨機對照試驗，試驗組采用褪黑素或褪黑素類似物治療，對照組采用安慰劑治療。檢索時限為建庫至 2021 年 1 月 14 日。由 2 名研究者獨立評價文獻質(zhì)量，采用 RevMan 5.4 軟件進行 meta 分析。結果 納入 11 篇隨機對照試驗研究，納入研究對象 1177 例，其中試驗組 588 例，對照組 589 例。Meta 分析結果顯示外源性褪黑素及其類似物能降低危重癥患者譫妄的發(fā)生率［比值比（odds ratio，OR）=0.45，95%置信區(qū)間（confidence interval，CI）（0.22，0.91），P=0.03］，縮短機械通氣時間［標準化均數(shù)差（standard mean difference，SMD）=–0.49，95%CI（–0.94，–0.03），P=0.04］，對危重患者的病死率［OR=0.73，95%CI（0.46，1.17），P=0.19］和重癥監(jiān)護病房住院時間［SMD=–0.05，95%CI（–0.26，0.15），P=0.61］的影響無統(tǒng)計學意義。結論 當前數(shù)據(jù)表明，外源性褪黑素及其類似物在降低危重癥患者譫妄的發(fā)生率、縮短機械通氣時間方面具有一定效果，對降低危重患者的病死率和重癥監(jiān)護病房住院時間無明顯影響。以上結論還需要更多高質(zhì)量研究加以證實。
目的探討褪黑素（melatonin，MT）對卵巢摘除（ovariectomy，OVX）大鼠骨量、血清炎癥因子水平和對脂多糖刺激下BMSCs培養(yǎng)液中炎癥因子水平和成骨能力的影響。方法將15只12周齡SD大鼠隨機分為3組，假手術組大鼠僅接受雙側側腹部切開縫合，OVX組行雙側OVX，OVX+MT組在雙側OVX術后行100 mg/（kg·d）MT口服干預。8周后采用ELISA法檢測大鼠血液樣本中炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-α表達水平；用Micro-CT檢測股骨遠端，觀察骨量及骨微結構變化并對骨體積分數(shù)、骨小梁厚度和骨小梁數(shù)量進行定量檢測。取3只3周齡SD大鼠，采用全骨髓培養(yǎng)法提取股骨骨髓中的BMSCs并傳代培養(yǎng)。經(jīng)鑒定后取第3～5代細胞，用不同濃度（0、1、10、100、1 000 μmol/L）MT干預并行細胞計數(shù)試劑盒8（cell counting kit 8，CCK-8）法檢測細胞活力，篩選最佳濃度MT用于后續(xù)實驗。將細胞分為成骨誘導組（A組）及成骨誘導+1/5/10 μg/mL脂多糖組（B～D組），進行相應干預后用ELISA法檢測細胞培養(yǎng)液中IL-1β、IL-6和TNF-α表達水平；根據(jù)CCK-8法和ELISA檢測結果，用刺激炎癥效果最顯著濃度的脂多糖以及最佳藥物濃度的MT加成骨誘導培養(yǎng)基對細胞進行干預，并設為E組，同樣采用ELISA法檢測各炎癥因子表達水平；之后分別對A、D、E組行ALP染色和茜素紅染色，并用實時熒光定量PCR（real time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）法檢測成骨相關基因Ⅰ型膠原α1鏈（collagen type Ⅰ alpha 1 chain，Col1a1）、RUNX家族轉錄因子2（RUNX family transcription factor 2，Runx2）表達水平。結果ELISA和Micro-CT檢測示，與假手術組比較，OVX組大鼠骨量減少，血清炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α表達水平升高（P<0.05）；經(jīng)MT治療后，OVX+MT組上述指標均得到改善（P<0.05）。成功提取大鼠BMSCs，CCK-8法檢測示100 μmol/L是不影響細胞活性的最大MT濃度，將其用于后續(xù)實驗。ELISA檢測示，加入脂多糖刺激后，B～D組細胞培養(yǎng)液中的炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-α表達水平明顯升高，與A組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；并且呈濃度依賴性，D組各炎癥因子表達水平明顯高于B、C組（P<0.05）；E組加入MT干預后，各炎癥因子表達水平較D組顯著降低（P<0.05）。ALP染色、茜素紅染色及RT-qPCR檢測示，與A組比較，D組ALP和茜素紅陽性面積百分比以及Col1a1、Runx2 mRNA相對表達量均顯著降低，經(jīng)MT干預后E組上述指標均顯著提升，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 結論MT可能通過降低大鼠體內(nèi)炎癥對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的骨量產(chǎn)生影響；MT能降低脂多糖刺激引起的BMSCs炎癥，并減弱其對BMSCs成骨分化的抑制。