目的 研究體外擴(kuò)增過(guò)程中，CD34+細(xì)胞內(nèi)B細(xì)胞特異單克隆鼠白血病毒整合位點(diǎn)基因1（B-cell-specific monoclonal leukemia virus insert site 1，Bmi1）和人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）基因的表達(dá)水平與其擴(kuò)增特性的相關(guān)性。 方法采用含F(xiàn)BS、干細(xì)胞生長(zhǎng)因子、Flt-3配體和促血小板生成素的IMDM培養(yǎng)基體外培養(yǎng)臍血CD34+細(xì)胞，在28 d培養(yǎng)過(guò)程中檢測(cè)CD34+細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)、CD34+細(xì)胞比生長(zhǎng)速率以及集落形成率的變化趨勢(shì)，并采用熒光定量PCR檢測(cè)體外擴(kuò)增過(guò)程中CD34+細(xì)胞內(nèi)Bmi1和hTERT基因表達(dá)水平變化，分析以上基因表達(dá)水平與CD34+細(xì)胞擴(kuò)增特性之間的關(guān)系。 結(jié)果經(jīng)過(guò)28 d的體外培養(yǎng)，CD34+細(xì)胞共擴(kuò)增了（20.1 ± 3.5）倍，其占擴(kuò)增后總細(xì)胞的比例由培養(yǎng)前的95.5% ± 2.6%下降至2.1% ± 0.4%；CD34+細(xì)胞的比生長(zhǎng)速率和集落形成率均在培養(yǎng)7 d后出現(xiàn)明顯下降，而細(xì)胞內(nèi)Bmi1和hTERT mRNA的表達(dá)水平在培養(yǎng)7 d時(shí)達(dá)最高，此后逐漸下降至培養(yǎng)前水平。 結(jié)論Bmi1和hTERT基因表達(dá)與CD34+細(xì)胞體外增殖能力可能存在一定相關(guān)性。
目的 研究CD34+ 細(xì)胞體外誘導(dǎo)的肝樣細(xì)胞在小鼠體內(nèi)修復(fù)受損肝組織的作用。 方法 采用密度梯度離心法分離臍血中的單個(gè)核細(xì)胞并獲得富集CD34+ 細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為1 × 105 個(gè)/mL，使用含干細(xì)胞生長(zhǎng)因子（stem cell factor，SCF）、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte growth factor，HGF）、EGF、抑瘤素M（oncostatin M，OSM）和bFGF的無(wú)血清培養(yǎng)基（5 種細(xì)胞因子濃度分別為50、20、20、10、10 ng/mL）體外誘導(dǎo)10 d。取6 周齡雌性ICR 小鼠48 只，以二乙酰氟氨和CCl4 注射制備肝損傷模型。將小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組（n=24），實(shí)驗(yàn)組將誘導(dǎo)后細(xì)胞（1.6 × 105 個(gè) / 只，含CD34+ 細(xì)胞1 × 104 個(gè)）通過(guò)尾靜脈注射入肝損傷小鼠體內(nèi)，對(duì)照組注射等量無(wú)血清培養(yǎng)基，術(shù)后7、14、21、28 d 兩組分別處死6 只小鼠，行HE 染色、PCR 凝膠電泳、免疫組織化學(xué)染色及肝功能檢測(cè)。 結(jié)果 HE 染色顯示，對(duì)照組術(shù)后28 d時(shí)肝組織形態(tài)恢復(fù)正常，實(shí)驗(yàn)組術(shù)后14 d 時(shí)即已恢復(fù)正常。PCR 凝膠電泳和免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組術(shù)后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)在肝組織中均可檢測(cè)到表達(dá)人血清白蛋白的細(xì)胞，而對(duì)照組術(shù)后28 d 內(nèi)均未檢測(cè)到。肝功能檢測(cè)結(jié)果顯示，對(duì)照組術(shù)后14 d 時(shí)谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性恢復(fù)正常，實(shí)驗(yàn)組小鼠術(shù)后7 d 時(shí)即已恢復(fù)正常；但兩組谷草轉(zhuǎn)氨酶活性在28 d 內(nèi)均未恢復(fù)。 結(jié)論 CD34+ 細(xì)胞經(jīng)體外向肝細(xì)胞方向誘導(dǎo)分化后，能在肝損傷的小鼠體內(nèi)促進(jìn)受損肝組織形態(tài)和功能的恢復(fù)，并能在小鼠受損肝臟中轉(zhuǎn)化為人源肝細(xì)胞。
【摘 要】 目的 探討通過(guò)細(xì)胞因子及其組合體外誘導(dǎo)臍血CD34+ 細(xì)胞轉(zhuǎn)分化成肝樣細(xì)胞的效果。 方法 采用密度梯度離心法分離臍血單個(gè)核細(xì)胞（mononuclear cell，MNC），從MNC 中獲得富集CD34+ 細(xì)胞。選用人白血病抑制因子、制瘤素M、bFGF、aFGF、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子、EGF 及干細(xì)胞生長(zhǎng)因子7 種細(xì)胞因子，濃度分別為10、10、10、10、20、20和50 ng/mL，設(shè)計(jì)了 49 種細(xì)胞因子組合，分別采用這些細(xì)胞因子組合體外培養(yǎng)臍血CD34+ 細(xì)胞，培養(yǎng)周期為28 d。以新鮮臍血CD34+ 細(xì)胞作為對(duì)照。每7 天檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞中細(xì)胞角蛋白19（cytokeratin19，CK-19）、CK-18、谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetase，GS）、人血清白蛋白（albumin，ALB）以及甲胎蛋白（α-fetoprotein，AFP）的mRNA 轉(zhuǎn)錄情況，并應(yīng)用免疫熒光法、過(guò)碘酸- 雪夫（periodic acid-schiff，PAS）染色與吲哚菁綠（indocyanine green，ICG）染色法檢測(cè)細(xì)胞分泌ALB、合成糖原以及解毒能力，以此判斷是否存在臍血CD34+ 細(xì)胞體外向肝樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化。 結(jié)果 在經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)后的CD34+ 細(xì)胞中均可檢測(cè)到人肝細(xì)胞所能表達(dá)的CK-19 、CK-18 和GS 的mRNA 條帶，未能檢測(cè)出肝細(xì)胞特征性的ALB 與AFP 的mRNA 條帶；而新鮮臍血CD34+ 細(xì)胞中以上5 種蛋白的mRNA 均未能檢出。免疫熒光染色觀察示誘導(dǎo)前后的細(xì)胞中均未能檢測(cè)到ALB 的表達(dá)，且均不能有效吞噬ICG 染料。PAS 反應(yīng)檢測(cè)結(jié)果顯示，經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)后的細(xì)胞紫紅色糖原沉積區(qū)域較新鮮臍血CD34+ 細(xì)胞增大，出現(xiàn)紫紅色區(qū)域的細(xì)胞增多。 結(jié)論 臍血CD34+ 細(xì)胞體外經(jīng)細(xì)胞因子組合誘導(dǎo)后，雖有肝細(xì)胞相關(guān)蛋白mRNA 表達(dá)，但未能轉(zhuǎn)分化為肝樣細(xì)胞。
目的 通過(guò)檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C(VEGF-C)及其受體Flt-4在肝癌組織中的表達(dá)，分析它們與肝癌脈管形成及臨床病理特征之間的關(guān)系，以了解VEGF-C在肝癌進(jìn)程中的作用。方法 采用免疫組化染色法檢測(cè)62例肝細(xì)胞肝癌(HCC)組織及15例正常肝組織中VEGF-C和Flt-4的表達(dá)，并計(jì)算以CD34為標(biāo)記的微血管密度(MVD)和以Flt-4為標(biāo)記的淋巴管密度(LVD)，分析它們相互之間及各自與HCC臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果 HCC組織中VEGF-C及Flt-4的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于正常肝組織(Plt;0.05,Plt;0.01)。HCC組織中VEGF-C的表達(dá)與有無(wú)門(mén)靜脈癌栓、腫瘤組織學(xué)分化程度、術(shù)后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移有關(guān)(Plt;0.05,Plt;0.01)； Flt-4的表達(dá)與腫瘤組織學(xué)分化程度及術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)(Plt;0.05,Plt;0.01)； MVD與腫瘤大小、TNM臨床分期、腫瘤組織學(xué)分化程度、有無(wú)門(mén)靜脈癌栓、術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移有關(guān)(Plt;0.05,Plt;0.01)； LVD與腫瘤組織學(xué)分化程度、術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移有關(guān)(Plt;0.05,Plt;0.01)。HCC組織中VEGF-C和Flt-4的表達(dá)及MVD和LVD這四者之間均兩兩呈正相關(guān)(Plt;0.01)。結(jié)論 VEGF-C和Flt-4在肝癌組織中高表達(dá)并與術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)，且與MVD及LVD呈正相關(guān)，提示VEGF-C/Flt-4通路可能通過(guò)促進(jìn)肝癌血管和淋巴管的生成從而影響肝癌的進(jìn)展及預(yù)后。
目的 探討內(nèi)皮抑素及堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）在膽囊癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，為膽囊癌的生物學(xué)治療探索理論依據(jù)。方法 運(yùn)用免疫組化SP法檢測(cè)內(nèi)皮抑素、bFGF及CD34在61例膽囊癌組織和10例正常膽囊組織中的表達(dá)，并通過(guò)CD34的表達(dá)計(jì)算微血管密度（MVD），分析它們與膽囊癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 內(nèi)皮抑素在正常膽囊組織及膽囊癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為40.00%(4/10)及77.05%(47/61)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)； 膽囊癌組織中，內(nèi)皮抑素的表達(dá)強(qiáng)度與其臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，與患者性別及年齡﹑腫瘤部位和大小及組織學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān)（P＞0.05）。bFGF在正常膽囊組織和膽囊癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為20.00%（2/10）及67.21%（41/61），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)； 膽囊癌組織中，bFGF的表達(dá)強(qiáng)度與其臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），與患者性別及年齡﹑腫瘤部位和大小及組織學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān)（P＞0.05）。膽囊癌組織中MVD為（76.66±20.15）個(gè)/HP，明顯高于正常膽囊組織的（29.53±5.03）個(gè)/HP（P＜0.01）。膽囊癌組織中，臨床分期Ⅲ~Ⅴ期的MVD為（80.53±17.98）個(gè)/HP，明顯高于Ⅰ＋Ⅱ期的（46.79±5.38）個(gè)/HP（P＜0.01）； 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的MVD為（94.60±7.28）個(gè)/HP，明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的（58.12±9.24）個(gè)/HP (P＜0.01)； MVD在組織學(xué)分級(jí)G1〔（60.59±14.71）個(gè)/HP〕、G2〔（83.08±15.30）個(gè)/HP〕及G3〔（96.53±6.92）個(gè)/HP〕者間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）； MVD與患者性別及年齡﹑腫瘤部位及大小無(wú)關(guān)（P＞0.05）。膽囊癌組織中內(nèi)皮抑素的表達(dá)與MVD有關(guān)（P＜0.01），bFGF的表達(dá)亦與MVD有關(guān)（P＜0.01）。結(jié)論 內(nèi)皮抑素、bFGF及CD34在膽囊癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起不同程度的作用，它們的檢測(cè)可給膽囊癌的早期診斷、惡性程度的判定和進(jìn)一步治療提供有效的依據(jù)。
目的 觀察直腸癌組織及其遠(yuǎn)端黏膜組織中P53蛋白表達(dá)及微血管分布，并從分子病理學(xué)水平探討直腸癌的安全遠(yuǎn)側(cè)切緣。方法 對(duì)45例中低位直腸癌下緣進(jìn)行標(biāo)記，PET/CT檢查并結(jié)合半定量免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)直腸癌及其遠(yuǎn)端黏膜組織中P53和CD34蛋白的表達(dá)。結(jié)果 直腸癌及其遠(yuǎn)端黏膜組織中均可見(jiàn)P53蛋白表達(dá)及微血管分布，直腸癌組織中P53蛋白表達(dá)及微血管密度(MVD)明顯高于直腸癌遠(yuǎn)端黏膜組織(P＜0.01)。直腸癌遠(yuǎn)端黏膜組織中P53蛋白表達(dá)及MVD隨著距離增大而減少，但有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的改變只在直腸癌遠(yuǎn)端1.5 cm內(nèi)。正常直腸組織中仍有P53蛋白表達(dá)和微血管分布。除直腸癌組織及其遠(yuǎn)端0.5 cm段黏膜組織中MVD與腫瘤直徑有關(guān)(P＜0.05)外，直腸癌及其遠(yuǎn)端黏膜組織中P53蛋白表達(dá)及MVD分布與腫瘤直徑、分期以及分化程度均無(wú)關(guān)。結(jié)論 從分子病理學(xué)角度說(shuō)明2 cm的直腸癌遠(yuǎn)端長(zhǎng)度是安全的遠(yuǎn)側(cè)切緣。
目的 觀察自體外周血 CD34+ 造血干細(xì)胞移植治療不同 Child-Pugh 分級(jí)的終末期肝?。╡nd-stage liver disease，ESLD）患者移植前及移植后 3、6、12、36 和 60 個(gè)月的吲哚氰綠 15 min 滯留率（indocyanine green retention rate at 15 min，ICGR15）變化情況。 方法 對(duì)內(nèi)科嚴(yán)格保守治療無(wú)效且已達(dá)到肝移植適應(yīng)證的不同 Child-Pugh 分級(jí)的 60 例晚期肝硬化患者，采用自體外周血 CD34+ 造血干細(xì)胞移植，分別在移植前及移植后 3、6、12、36 和 60 個(gè)月進(jìn)行 ICGR15 測(cè)定，并對(duì)各 Child-Pugh 分級(jí)組內(nèi)的各時(shí)間點(diǎn)結(jié)果進(jìn)行比較，以及比較各 Child-Pugh 分級(jí)級(jí)組之間的 ICGR15 值變化率。 結(jié)果 各 Child-Pugh 分級(jí)組 ICGR15 值隨時(shí)間延長(zhǎng)均呈下降趨勢(shì)，其中 Child-Pugh A 級(jí)組內(nèi)：移植后 6 個(gè)月、12 個(gè)月、36 個(gè)月及 60 個(gè)月組與術(shù)前及移植后 3 個(gè)月組比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但移植后 3 個(gè)月組與術(shù)前比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而移植后 12 個(gè)月組與移植后 60 個(gè)月組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Child-Pugh B 級(jí)組內(nèi)：移植后 6 個(gè)月、12 個(gè)月、36 個(gè)月及 60 個(gè)月組與術(shù)前及移植后 3 個(gè)月組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），移植后 3 個(gè)月組與術(shù)前比較差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），移植后 6 個(gè)月組與 12 個(gè)月、36 個(gè)月及 60 個(gè)月組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Child-Pugh C 級(jí)組內(nèi)：移植后 6 個(gè)月、12 個(gè)月、36 個(gè)月及 60 個(gè)月組與術(shù)前及移植后 3 個(gè)月組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但移植后 3 個(gè)月組與術(shù)前比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而移植后 6 個(gè)月組與 12 個(gè)月、36 個(gè)月及 60 個(gè)月組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。各 Child-Pugh 分級(jí)組之間 ICGR15 變化率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論 自體外周血 CD34+ 造血干細(xì)胞移植能長(zhǎng)期有效地改善 ESLD 患者的肝功能儲(chǔ)備能力，提高手術(shù)安全性。
目的 檢測(cè)甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）陰性與 AFP 陽(yáng)性穿刺活檢人肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）中 CD34 及多克隆癌胚抗原（polyclone carcinoembryonic antigen，pCEA）的表達(dá)情況，探討其病理診斷意義。 方法 收集 2013 年—2015 年恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院穿刺活檢病理確診為 HCC 標(biāo)本 54 例，依據(jù)血清學(xué)及免疫組織化學(xué)法（免疫組化）檢測(cè) AFP 結(jié)果，將患者分為 AFP 陽(yáng)性組（n=33）及 AFP 陰性組（n=21）。應(yīng)用免疫組化技術(shù)，檢測(cè) 54 例 HCC 組織中 CD34、pCEA 的表達(dá)情況。 結(jié)果 AFP 陽(yáng)性組 pCEA 的陽(yáng)性表達(dá)率（69.7%）高于 AFP 陰性組（38.1%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而 CD34 在 AFP 陽(yáng)性組（90.91%）與 AFP 陰性組（85.71%）中的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論 AFP 與 CD34、pCEA 聯(lián)合檢測(cè)有利于肝穿刺活檢中 HCC 的診斷及其鑒別診斷。
采用共價(jià)接枝將 CD34 抗體接枝到聚乙二醇修飾的四氧化三鐵磁性納米粒子上，構(gòu)建具有 CD34 抗體與 PEG 共同修飾的功能型磁性納米粒子。通過(guò)紅外檢測(cè)（FT-IR）、納米粒子粒徑分析（動(dòng)態(tài)光散射和透射電子顯微鏡）等方法對(duì)修飾后的磁性納米粒子進(jìn)行檢測(cè)，并將其與內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）共混培養(yǎng)，評(píng)價(jià)納米粒子的細(xì)胞相容性以及對(duì) EPCs 短時(shí)間的結(jié)合效果，然后在動(dòng)態(tài)外加磁場(chǎng)的作用下評(píng)價(jià)修飾后磁性納米粒子對(duì) EPCs 的定向引導(dǎo)效果。結(jié)果表明，CD34 抗體成功修飾到磁性納米粒子表面，修飾后的納米粒子在一定的濃度范圍內(nèi)有較好的細(xì)胞相容性，短時(shí)間對(duì) EPCs 具有較好的識(shí)別結(jié)合作用，并且能在外加磁場(chǎng)作用下初步實(shí)現(xiàn)在動(dòng)態(tài)環(huán)境下對(duì) EPCs 的定向引導(dǎo)。
目的 檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、白細(xì)胞分化抗原34（CD34）及CXC趨化因子受體4（CXCR4）在轉(zhuǎn)移性鼻咽癌患者鼻咽部腫瘤組織中的表達(dá)，探討它們與鼻咽癌各種臨床病理因素的關(guān)系以及它們之間的相互聯(lián)系。 方法 采用免疫組織化學(xué)鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)法檢測(cè)2003年3月－2009年5月35例轉(zhuǎn)移性鼻咽癌患者VEGF、CD34及CXCR4在鼻咽部腫瘤組織中的表達(dá)情況，結(jié)合患者臨床病理特征進(jìn)行分析。 結(jié)果 轉(zhuǎn)移性鼻咽癌患者鼻咽部腫瘤組織中的VEGF及CXCR4陽(yáng)性表達(dá)率分別為62.9%（22∕35）和42.9%（15∕35），CD34計(jì)數(shù)為11～92，平均43.2 ± 20.5。無(wú)肺轉(zhuǎn)移較有肺轉(zhuǎn)移的患者VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率高（78.9%、43.8%，P=0.043），多器官轉(zhuǎn)移較單器官轉(zhuǎn)移的患者CXCR4的表達(dá)強(qiáng)度高（62.5%、26.3%，P=0.044）。 結(jié)論 VEGF表達(dá)陽(yáng)性的患者易發(fā)生肺轉(zhuǎn)移；CXCR4強(qiáng)表達(dá)的患者易發(fā)生多器官轉(zhuǎn)移。