目的 探討Ghrelin對大鼠離體胰腺組織胰島素分泌及葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白-2 （Glut-2）表達的影響。方法 將25只Wistar大鼠隨機分為正常對照組（NC組）、高糖組（HCG組）、高糖＋高濃度Ghrelin （10-8mol/L）組（HCG＋HCGh組）、高糖＋中濃度Ghrelin （10-9mol/L）組（HCG＋MCGh組）及高糖＋低濃度Ghrelin （10-10mol/L）組（HCG＋LCGh組），每組5只。建立大鼠離體胰腺灌注模型，經(jīng)腹主動脈遠端相應灌注低糖 （5.5mmol/L）、單純高糖 （33.3mmol/L） 溶液或加入上述不同濃度Ghrelin的高糖 （33.3mmol/L） 溶液。采用ELISA法測定門靜脈流出液的胰島素水平，采用免疫組化染色方法半定量測定Glut-2蛋白在離體胰腺組織中的表達水平，采用透射電鏡觀察胰島β細胞的超微結(jié)構(gòu)改變。結(jié)果 5組大鼠的空腹血漿葡萄糖 （FBG）、空腹血漿胰島素（FINS）、胰島素抵抗指數(shù) （HOMA-IR） 及胰島素分泌指數(shù) （HOMA-β） 比較差異均無統(tǒng)計學意義 （P＞0.05）。用低糖溶液灌注時，5組大鼠門靜脈流出液的胰島素水平比較差異無統(tǒng)計學意義 （P＞0.05）；而用高糖溶液灌注后，胰島素的分泌在3min和10～12min時出現(xiàn)了2個高峰 （以HCG＋HCGh組最高）。NC組大鼠胰島β細胞Glut-2蛋白的平均光密度值高于其余4組 （P＜0.05）。透射電鏡觀察結(jié)果顯示，高糖各組大鼠離體胰腺的凋亡征象較NC組嚴重，但HCG＋HCGh組的細胞器損害程度較HCG＋MCGh組及HCG＋LCGh組輕。結(jié)論 在大鼠離體胰腺中，Ghrelin可促進高濃度葡萄糖誘導的胰島素分泌，對胰島β細胞起保護作用。
目的研究Ghrelin對L6大鼠成肌細胞在棕櫚酸誘導下的葡萄糖代謝和胰島素敏感性的影響，并探討其可能的機理。 方法培養(yǎng)L6大鼠成肌細胞，誘導分化后利用0.3 mmol/L的棕櫚酸作用16 h，實驗組加入不同劑量的Ghrelin（1、10和100 nmol/L）作用8 h，采用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法（GOD-POD）檢測骨骼肌細胞對葡萄糖的攝取，并在熒光共聚焦顯微鏡下觀察細胞膜葡萄糖轉(zhuǎn)運因子-4（GLUT-4）蛋白染色；采用免疫印跡（Western blot）法檢測骨骼肌細胞中總蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（pAkt）、總糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）和磷酸化糖原合成酶激酶-3β（pGSK-3β）蛋白的表達。 結(jié)果Ghrelin使胰島素抵抗之L6大鼠成肌細胞葡萄糖攝取量增加，細胞膜GLUT-4染色加深，pAkt及pGSK-3β蛋白表達增加（磷酸化表達增加），而總Akt和總GSK-3β蛋白無明顯變化，這種作用可被PI3K阻斷劑（LY294002）消除。 結(jié)論Ghrelin通過磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3β（PI3K/Akt/GSK-3β）信號途徑促進L6大鼠成肌細胞葡萄糖攝取量，從而提高L6大鼠成肌細胞胰島素的敏感性。
急性肺損傷( ALI) /急性呼吸窘迫綜合征( ARDS) 是多種原因誘發(fā)的發(fā)病機制相同的綜合征。結(jié)合1994 年美國-歐洲共識會議[ 1 , 2] 及1999 年中華醫(yī)學會呼吸病學分會[ 3 ] 對該綜合征制定的診斷標準, 同時符合以下5 項者, 可診斷為ALI 或ARDS: ( 1) 有ALI/ARDS 的高危因素; ( 2) 急性起病、呼吸頻數(shù)和( 或) 呼吸窘迫; ( 3) 低氧血癥: 氧合指數(shù)( PaO2 /FiO2 ) : ALI lt; 300 mm Hg ( 1 mm Hg =0. 133 kPa) , ARDS lt;200 mm Hg; ( 4) 胸部X 線顯示兩肺浸潤陰影; ( 5) 肺動脈楔壓≤18 mm Hg或臨床上能除外心源性肺水腫
目的探討應用外源性胃促生長素（ghrelin）對胃大部切除術后大鼠早期恢復的影響。方法將12只胃大部切除（畢Ⅰ式）大鼠隨機均分為2組，分別于腹腔內(nèi)注射生理鹽水或胃促生長素，稱量術前和術后1～7 d的大鼠體重和每日攝食量； 術后第7天處死大鼠，實時熒光定量PCR法測定大鼠胃底組織中胃促生長素mRNA表達相對量，并檢測吻合口爆破壓和吻合口組織中羥脯氨酸含量。結(jié)果2組大鼠之間術前及術后1～7 d體重的差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。生理鹽水組大鼠體重術后逐漸降低，并均明顯低于術前（Plt;0.01），且在術后第5天達到最低（Plt;0.01），后逐漸增加，但仍均低于術前（Plt;0.01）； 胃促生長素組大鼠體重術后逐漸降低，除術后1 d與術前比較的差異無統(tǒng)計學意義（P=0.693）外，均明顯低于術前（Plt;0.01）， 在術后第4天達到最低（Plt;0.01），后逐漸增加，但仍均低于術前（Plt;0.05或Plt;0.01）。胃促生長素組大鼠的累積攝食量為（52.50±6.77） g，明顯高于生理鹽水組大鼠的(45.67±7.47) g，Plt;0.05。術后第7天胃促生長素組大鼠胃底組織中胃促生長素mRNA表達相對量為0.08±0.04，明顯低于生理鹽水組大鼠的0.22±0.07（Plt;0.01）。胃促生長素組大鼠吻合口爆破壓為（172.33±10.44） mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）， 明顯高于生理鹽水組的(155.83±6.62) mm Hg，Plt;0.05。胃促生長素組大鼠吻合口組織中羥脯氨酸含量為（0.50±0.29）μg/mg wet tissue，明顯高于生理鹽水組大鼠的(0.43±0.05) μg/mg wet tissue，Plt;0.01。結(jié)論胃促生長素能有效促進胃大部切除術后大鼠的早期恢復，而外源性胃促生長素的攝入可抑制機體術后早期的負反饋性代償作用。
目的 建立生長激素促分泌素受體(ghrelin receptor，GHS-R)基因敲除小鼠胚胎干細胞（ES細胞）雜合子模型，為研究GHS-R基因的功能奠定基礎。方法 用TK-neo置換原X-pPNT載體的PGK-neo構(gòu)建目標載體。以小鼠基因組DNA為模板, 用PCR方法擴增2條同源臂，將其按照一定方向裝入含有TK-neo的X-pPNT載體，并測序鑒定。載體線性化及純化后電穿孔轉(zhuǎn)染小鼠ES細胞，用G418和更昔洛韋(Gancyclovir)對電穿孔轉(zhuǎn)染后的ES細胞進行正、負篩選培養(yǎng)，得到雙藥抗性ES細胞，克隆后抽提基因組DNA，分別用PCR方法鑒定2條同源臂，并測序確定成功同源重組的ES細胞克隆。結(jié)果 改建X-pPNT載體成功，PCR獲得2條同源臂片段，測序正確，并按一定方向裝入打靶載體，ES細胞轉(zhuǎn)染后經(jīng)雙藥篩選得到328個陽性ES細胞克隆，PCR及測序鑒定證實3個克隆發(fā)生同源重組。結(jié)論 本研究成功獲得了GHS-R(－/+)雜合子小鼠ES細胞克隆，為進一步通過顯微注射及雜交育種獲得GHS-R基因敲除小鼠打下了基礎。
目的探討Roux-en-Y胃旁路術（RYGB）改善2型糖尿病大鼠（Goto-Kakizaki大鼠，GK大鼠）骨骼肌胰島素抵抗的可能機制。 方法30只GK大鼠隨機分為GK-RYGB組、GK-假手術組、GK-對照組，另取10只Wistar大鼠作為正常對照組。術后28 d時處死實驗動物。ELISA法檢測血漿ghrelin濃度，免疫印跡法檢測骨骼肌組織的磷酸化（p）-/總（t）-PI3Kp85α、p-/t-Akt/PKB及細胞膜（m）-/t-GLUT4蛋白的相對表達量，實時熒光定量PCR法檢測骨骼肌組織中PI3Kp85α、Akt/PKB及GLUT4 mRNA的表達。 結(jié)果①血漿ghrelin濃度在正常對照組明顯高于GK-對照組（P＜0.01）和GK-假手術組（P＜0.01）；GK-RYGB組也明顯高于GK-對照組（P＜0.01）及GK-假手術組（P＜0.01），但與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。②p-/t-PI3Kp85α、p-/t-Akt/PKB及m-/t-GLUT4蛋白相對表達量在正常對照組均較GK-對照組（分別P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01）和GK-假手術組（分別P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01）明顯上升；GK-RYGB組亦較GK-對照組（分別P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01）和GK-假手術組（分別P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01）均分別明顯上升。③骨骼肌組織中PI3Kp85α、Akt/PKB及GLUT4 mRNA的表達在正常對照組均較GK-對照組（分別P＜0.01、P＜0.05、P＜0.05）和GK-假手術組（分別P＜0.01、P＜0.05、P＜0.05）明顯上升；GK-RYGB組較GK-對照組（分別P＜0.01、P＜0.05、P＜0.05）和GK-假手術組（分別P＜0.01、P＜0.05、P＜0.05）也均分別明顯上升。 結(jié)論①RYGB術后GK大鼠血漿ghrelin水平顯著升高。②RYGB術能夠上調(diào)GK大鼠骨骼肌組織中PI3Kp85α、Akt/PKB mRNA和磷酸化蛋白的表達，并上調(diào)GLUT4的轉(zhuǎn)錄和翻譯，促使更多的GLUT4在細胞膜表達，增加骨骼肌組織對葡萄糖的攝取，從而改善骨骼肌組織的胰島素抵抗。
目的探討Roux-en-Y胃旁路術（Roux-en-Y gastric bypass surgery，RYGB）后2型糖尿?。═2DM）大鼠血清中生長激素釋放肽（Ghrelin）和內(nèi)脂素（Visfatin）水平的變化及其意義。 方法先將30只健康雄性8周齡SD大鼠隨機分為糖尿病組22只和空白對照組（CSO組）8只。糖尿病組的22只大鼠給予高脂高糖飲食6周后，再腹腔注射鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ），最終成功建立T2DM大鼠模型18只。將建模成功的18只大鼠再隨機分為RYGB組10只和假手術組（DSO組）8只。RYGB組大鼠接受RYGB，DSO和CSO大鼠接受假手術。分別于術前和術后4周測定3組大鼠的空腹血糖（FBG）、空腹血清胰島素（FINS）、Ghrelin及Visfatin水平，計算術后4周時的肥胖指數(shù)和胰島素敏感指數(shù)（ISI），進行組間比較。 結(jié)果相較于術前，RYGB組大鼠的體質(zhì)量、肥胖指數(shù)、FBG水平、FINS及Visfatin水平均降低（P < 0.050），ISI值和Ghrelin水平升高（P < 0.050），但DSO組和CSO組大鼠手術前后的體質(zhì)量、體長、肥胖指數(shù)、FBG水平、FINS水平、ISI值、Ghrelin水平及Visfatin水平比較差異均無統(tǒng)計學意義（P > 0.050）。此外，3組大鼠手術前后的Ghrelin和Visfatin水平的差值比較差異均有統(tǒng)計學意義（P < 0.001），RYGB組的Ghrelin、Visfatin水平的差值較DSO組和CSO組大（P < 0.050），但DSO和CSO組的Ghrelin、Visfatin水平的差值比較差異均無統(tǒng)計學意義（P > 0.050）。 結(jié)論術后血清Ghrelin水平的升高和Visfatin水平的降低可能是RYGB治療肥胖型T2DM的重要機理。