目的 探討用小RNA 干擾抑制Ku80 基因表達以提高A549 肺癌細胞的放射敏感性。方法 設計并化學合成Ku80 siRNA, 轉染體外培養(yǎng)的A549 肺癌細胞。利用RT-PCR 和Western blot分別從mRNA 和蛋白質水平對轉染后的細胞Ku80 基因表達情況進行測定, 同時上述轉染的細胞分別照射2、4、6、8 及10 Gy, 利用克隆形成實驗測定放射敏感性的變化。結果 RT-PCR 檢測顯示在A549 肺癌細胞轉染Ku80 siRNA 后24、48 和72 h 三個時間點Ku80 mRNA 含量減少, Western blot 分析顯示在轉染48 和72 h 兩個時間點Ku80 蛋白含量減少, 與對照組比較有統(tǒng)計學差異( P lt;0. 05) 。克隆形成實驗提示A549 肺癌細胞轉染Ku80 siRNA 后放射敏感性增強。結論 Ku80 siRNA 轉染A549 肺癌細胞后能夠有效抑制Ku80 基因表達, 提高其放射敏感性。
目的 探討患者體內肺癌細胞Ku80 蛋白含量與其對順鉑敏感性的相關性。方法 收集肺癌患者胸腔積液中的肺癌細胞進行體外原代培養(yǎng), 通過傳代進行純化和擴增后進行實驗。體外藥敏試驗采用CCK-8 法測定肺癌細胞對順鉑的敏感性, 獲得各樣本的半數(shù)抑制濃度( IC50 ) 。利用Western blot 法測定各樣本細胞內Ku80 蛋白含量。分析Ku80 蛋白含量與順鉑敏感性的相關性。結果 非小細胞肺癌( NSCLC) 組IC50 為( 4. 40 ±3. 39) mg/L, 小細胞肺癌( SCLC) 組IC50 為( 1. 02 ±0. 54) mg/L, 二者比較差異有統(tǒng)計學意義( P lt;0. 001) 。NSCLC 組Ku80 蛋白相對含量為0. 80 ±0. 45,而SCLC 組為0. 48 ±0. 25, 二組之間比較差異有統(tǒng)計學意義( P lt;0. 05) 。通過相關性分析得到肺癌患者Ku80 含量與IC50呈正相關( r = 0. 618, P lt; 0. 001) 。結論 NSCLC 患者Ku80 基因表達高于SCLC患者, 可能與NSCLC 對化療敏感性差有關。肺癌細胞Ku80 蛋白含量與其對順鉑敏感性呈負相關。Ku80 蛋白含量可作為預測肺癌患者以鉑類為基礎的化療敏感性的候選指標