目的 探索體外構(gòu)建人外泌汗腺樣結(jié)構(gòu)的方法。 方法 取自愿捐獻(xiàn)的正常腋部全層皮膚，分離培養(yǎng)汗腺腺上皮細(xì)胞，倒置相差顯微鏡下觀察。將汗腺腺上皮細(xì)胞以2 × 105 個(gè)/cm2 密度接種至Matrigel 凝膠下（A 組）、凝膠上（B 組）、凝膠中（C 組），進(jìn)行三維立體培養(yǎng)，激光掃描共聚焦顯微鏡、HE 染色及免疫組織化學(xué)染色觀察有無汗腺樣結(jié)構(gòu)形成。 結(jié)果 原代汗腺分泌部上皮細(xì)胞接種后24 h 可見細(xì)胞貼壁，貼壁細(xì)胞呈梭形，2 ～ 3 d 后細(xì)胞呈多克隆麥粒樣生長，14 d 后細(xì)胞融合呈鋪路石樣生長，融合后的汗腺腺上皮細(xì)胞呈扁平多角形，中間有較大圓形核；第1 代細(xì)胞形態(tài)與原代極為相似；第2 代細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，多數(shù)伸出長偽足；第3 代細(xì)胞多呈星形狀，細(xì)胞體積大，與鄰近細(xì)胞相互融合。A 組汗腺腺上皮細(xì)胞三維立體培養(yǎng)11 d 形成管腔結(jié)構(gòu)；B 組汗腺腺上皮細(xì)胞立體培養(yǎng)8 h，細(xì)胞胞漿伸長呈絲狀，與鄰近細(xì)胞相連呈管腔或半管腔形，但細(xì)胞增殖不明顯；C 組汗腺腺上皮細(xì)胞三維立體培養(yǎng)2 ～ 3 d，細(xì)胞分裂增生，增生細(xì)胞彼此緊密排列成管腔結(jié)構(gòu)，中間可見明顯腔隙，隨新生細(xì)胞增多，管腔結(jié)構(gòu)逐漸演變?yōu)椴灰?guī)則球形結(jié)構(gòu)。激光掃描共聚焦顯微鏡觀察示C 組形成球形結(jié)構(gòu)，細(xì)胞團(tuán)中央有管腔結(jié)構(gòu)；球形結(jié)構(gòu)HE 染色示為管腔結(jié)構(gòu)，免疫組織化學(xué)染色示角蛋白18、癌胚抗原表達(dá)陽性，與汗腺分泌部管狀結(jié)構(gòu)極為相似。 結(jié)論 汗腺腺上皮細(xì)胞在Matrigel 凝膠中三維立體培養(yǎng)可形成汗腺樣結(jié)構(gòu)。
目的探討人體外泌汗腺組織體外三維培養(yǎng)方法，并對(duì)構(gòu)建的三維組織進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析。 方法取整形手術(shù)患者自愿捐贈(zèng)的正常腹部全層皮膚，經(jīng)Ⅱ型膠原酶消化分離人體外泌汗腺組織，以含5 ng/mL重組人EGF、25 mg/mL牛垂體提取物、100 U/mL青霉素和100 μg/mL鏈霉素的無血清角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。待原代細(xì)胞達(dá)80%融合后，調(diào)整細(xì)胞濃度至1×105個(gè)/mL；取0.3 mL細(xì)胞懸液與0.3 mL Matrigel基底膜基質(zhì)混勻培養(yǎng)，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。培養(yǎng)14 d后，取標(biāo)本行冰凍切片，HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)，免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)細(xì)胞角蛋白7（cytokeratin 7，CK7）和CK19抗原表達(dá)。 結(jié)果倒置相差顯微鏡觀察示，經(jīng)Ⅱ型膠原酶消化后大量汗腺組織游離；貼壁后3～5 d長出汗腺細(xì)胞，細(xì)胞持續(xù)分裂達(dá)2～3周，形成圍繞汗腺組織塊的環(huán)狀單層；3～4周后細(xì)胞衰老。汗腺細(xì)胞接種于Matrigel基底膜基質(zhì)中2～3 d，細(xì)胞開始分裂，隨后形成小細(xì)胞團(tuán)、管狀結(jié)構(gòu)以及類球狀結(jié)構(gòu)；約2周時(shí)混合培養(yǎng)物開始液化，培養(yǎng)終止。HE染色示部分細(xì)胞形成中空管狀結(jié)構(gòu)，管壁由1～2層細(xì)胞構(gòu)成，類似于在體汗腺的分泌部和導(dǎo)管部；免疫組織化學(xué)染色見培養(yǎng)的汗腺細(xì)胞CK7和CK19表達(dá)均呈陽性。 結(jié)論人汗腺細(xì)胞接種于Matrigel基底膜基質(zhì)三維培養(yǎng)，形成的組織結(jié)構(gòu)模擬了在體汗腺的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)。